Ekspert medyczny artykułu
Nowe publikacje
Analiza polimorfizmu długości fragmentów restrykcyjnych
Ostatnia recenzja: 05.07.2025
Cała zawartość iLive jest sprawdzana medycznie lub sprawdzana pod względem faktycznym, aby zapewnić jak największą dokładność faktyczną.
Mamy ścisłe wytyczne dotyczące pozyskiwania i tylko linki do renomowanych serwisów medialnych, akademickich instytucji badawczych i, o ile to możliwe, recenzowanych badań medycznych. Zauważ, że liczby w nawiasach ([1], [2] itd.) Są linkami do tych badań, które można kliknąć.
Jeśli uważasz, że któraś z naszych treści jest niedokładna, nieaktualna lub w inny sposób wątpliwa, wybierz ją i naciśnij Ctrl + Enter.
Powszechne stosowanie różnych endonukleaz restrykcyjnych do analizy chromosomalnego DNA ujawniło ogromną zmienność ludzkiego genomu. Nawet niewielkie zmiany w kodujących i regulacyjnych regionach genów strukturalnych mogą prowadzić do zaprzestania syntezy określonego białka lub utraty jego funkcji w organizmie człowieka, co zwykle wpływa na fenotyp pacjenta. Jednak około 90% ludzkiego genomu składa się z sekwencji niekodujących, które są bardziej zmienne i zawierają wiele tak zwanych neutralnych mutacji lub polimorfizmów i nie mają ekspresji fenotypowej. Takie polimorficzne regiony (loci) są wykorzystywane w diagnostyce chorób dziedzicznych jako markery genetyczne. Loci polimorficzne występują we wszystkich chromosomach i są powiązane ze specyficznym regionem genu. Poprzez określenie lokalizacji locus polimorficznego możliwe jest ustalenie, który gen jest powiązany z mutacją, która spowodowała chorobę u pacjenta.
Do wyizolowania polimorficznych regionów DNA stosuje się enzymy bakteryjne - restryktazy, których produktem są miejsca restrykcyjne. Spontaniczne mutacje zachodzące w miejscach polimorficznych czynią je opornymi lub odwrotnie, wrażliwymi na działanie określonej restryktazy.
Zmienność mutacji w miejscach restrykcyjnych można wykryć, zmieniając długość fragmentów restrykcyjnych DNA poprzez ich rozdzielenie za pomocą elektroforezy i późniejszej hybrydyzacji ze specyficznymi sondami DNA. W przypadku braku restrykcji w miejscu polimorficznym, na elektroforegramach zostanie wykryty jeden duży fragment, a w jego obecności obecny będzie mniejszy fragment. Obecność lub brak miejsca restrykcyjnego w identycznych loci homologicznych chromosomów pozwala na dość wiarygodne znakowanie genu zmutowanego i prawidłowego oraz śledzenie jego transmisji do potomstwa. Tak więc, podczas badania DNA pacjentów w obu chromosomach, w których miejsce restrykcyjne jest obecne w regionie polimorficznym, na elektroforegramie zostaną wykryte krótkie fragmenty DNA. U pacjentów homozygotycznych pod względem mutacji zmieniającej polimorficzne miejsce restrykcyjne, zostaną wykryte dłuższe fragmenty, a u pacjentów heterozygotycznych, krótkie i długie fragmenty.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]