Testy wrażliwości na antybiotyki: przygotowanie, rozszyfrowanie, ile się robi

Obecnie coraz popularniejsze staje się badanie wrażliwości na antybiotyki. Mikroflora ludzka jest dość zróżnicowana, reprezentowana przez dużą liczbę mikroorganizmów w różnych biotopach.

Firmy farmaceutyczne opracowały dużą liczbę środków przeciwbakteryjnych, antybiotyków, które pomagają utrzymać normalny stosunek i liczbę populacji drobnoustrojów. Wraz z nadejściem ery antybiotyków wyleczono wiele chorób, które wcześniej uważano za śmiertelne. Ale mikroorganizmy również dążą do przetrwania, stopniowo dostosowując się do działania leków przeciwbakteryjnych. Z czasem wiele z nich nabyło oporność na wiele leków, utrwaliło ją w genotypie i zaczęło przekazywać z pokolenia na pokolenie. Tak więc nowe mikroorganizmy są początkowo niewrażliwe na niektóre leki, a ich stosowanie może być nieskuteczne. Farmaceuci opracowują coraz więcej nowych produktów, dodając do nich nowe składniki aktywne, zmieniając podstawową formułę. Ale stopniowo rozwija się również oporność na nie.

Przyczyna zwiększonej oporności mikroflory na wiele leków, a nawet ich analogów, często kryje się w nieprawidłowym i niekontrolowanym stosowaniu antybiotyków. Lekarze przepisują antybiotyki i ich kombinacje na różne choroby bakteryjne. Jednocześnie nie ma wstępnej oceny ich skuteczności, nie dobiera się optymalnej dawki, co jest bardzo ważne zarówno dla leczenia, jak i zapobiegania mechanizmom rozwoju dalszej oporności. Wiele osób błędnie przepisuje terapię antybakteryjną nawet na choroby wirusowe, która jest nieskuteczna, ponieważ antybiotyk nie działa na wirusy.

Terapia jest często przepisywana bez wstępnego badania wrażliwości, nie wykonuje się doboru środka czynnego i wymaganej dawki dla każdej konkretnej choroby i biotopu. Ponieważ antybiotyki są przepisywane „w ciemno”, często zdarzają się przypadki, gdy nie wykazują żadnej aktywności wobec mikroorganizmów, które wywołały chorobę i których liczebność należy zmniejszyć. Zamiast tego oddziałują na innych przedstawicieli mikroflory, powodując dysbakteriozę, która jest również dość niebezpieczną patologią i może prowadzić do poważnych konsekwencji. Szczególnie niebezpieczne są przypadki, gdy antybiotyk niszczy normalną mikroflorę, która ma za zadanie chronić organizm i utrzymywać jego normalne funkcjonowanie. Są również przypadki, gdy przepisuje się zbyt dużo lub zbyt mało leku.

Pacjenci są również nieodpowiedzialni w kwestii leczenia. Często leczenie jest przerywane po tym, jak objawy choroby przestaną dokuczać. Jednocześnie wielu woli nie kończyć pełnego cyklu. Jest to jeden z czynników, które przyczyniają się do rozwoju oporności u bakterii. Pełny cykl ma na celu całkowite zabicie patogennej mikroflory. Jeśli cykl nie zostanie ukończony, nie zostanie ona całkowicie zabita. Te mikroorganizmy, które przeżyją, przechodzą mutacje, rozwijają mechanizmy zapewniające im ochronę przed tym lekiem i przekazują go następnym pokoleniom. Niebezpieczeństwo polega na tym, że oporność rozwija się nie tylko w odniesieniu do tego konkretnego leku, ale także do całej grupy leków.

Dlatego też obecnie jednym z najskuteczniejszych sposobów racjonalnej terapii i zapobiegania oporności jest wstępne określenie wrażliwości na przepisany lek i dobór jego optymalnej dawki.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ]

Wskazania do zabiegu testy wrażliwości na antybiotyki

Zwykle taką analizę należy przeprowadzić we wszystkich przypadkach, w których wymagana jest terapia antybakteryjna. Opierając się na podstawowych prawach antybiotykoterapii, każdy antybiotyk można przepisać dopiero po przeprowadzeniu wstępnej oceny wrażliwości mikroflory na ten środek i ustaleniu optymalnego stężenia substancji czynnej w warunkach laboratoryjnych. W praktyce, z różnych przyczyn i okoliczności, takiego badania nie przeprowadza się przed rozpoczęciem leczenia, a lekarz zmuszony jest dobrać lek „losowo”.

Obecnie testy wrażliwości wykonuje się tylko w przypadkach, gdy lekarz ma poważne wątpliwości co do skuteczności przepisanego leku, w przypadkach długotrwałego braku efektu leku, a także przy wielokrotnym stosowaniu tego samego leku w ograniczonym okresie czasu. Wrażliwość często określa się w leczeniu chorób przenoszonych drogą płciową. Wielu specjalistów zwraca się do analizy w przypadku działań niepożądanych, reakcji alergicznych i gdy zachodzi konieczność zastąpienia jednego leku innym.

Analizę często wykorzystuje się również do doboru leków do terapii przeciwbakteryjnej w okresie rekonwalescencji po zabiegach operacyjnych, zabiegach laparoskopowych i usunięciu narządów. Na oddziałach chirurgii i chirurgii ropnej takie badanie jest po prostu konieczne, ponieważ oporność rozwija się tu dość szybko. Ponadto rozwijają się superoporne „nabyte w szpitalu”. Wiele prywatnych klinik podchodzi do przepisywania leków z pełną odpowiedzialnością – dopiero po sprawdzeniu wrażliwości. W wielu przypadkach budżet państwowych instytucji po prostu nie pozwala na przeprowadzenie takich badań u każdego pacjenta, który wymaga terapii przeciwbakteryjnej.

[ 9 ], [ 10 ], [ 11 ]

Przygotowanie

Przygotowanie do badania nie wymaga żadnych szczególnych środków. Jest takie samo jak do wszelkich testów. Kilka dni przed badaniem należy powstrzymać się od picia alkoholu. Rano, w dniu pobrania materiału, w większości przypadków nie można jeść ani pić. Ale wszystko zależy od rodzaju analizy. Materiał do badania może być różny, w zależności od choroby.

W przypadku chorób gardła i dróg oddechowych pobiera się wymaz z gardła i nosa. W wenerologii, ginekologii, urologii pobiera się wymazy z narządów płciowych i krew do analizy. W chorobach nerek często wymagany jest mocz. W przypadku chorób przewodu pokarmowego i niektórych chorób zakaźnych bada się kał i wymioty. Czasami można zbadać mleko matki, wydzielinę z nosa, wydzielinę z oczu, ślinę i plwocinę. W przypadku poważnych patologii i podejrzenia procesu zakaźnego bada się nawet płyn mózgowo-rdzeniowy. Spektrum jest dość szerokie.

Cechy pobierania materiału są określone przez jego przynależność biologiczną. Tak więc mocz i kał pobiera się rano do czystego pojemnika lub specjalnego pojemnika na materiał biologiczny. Mleko matki pobiera się przed karmieniem. Środkową część pobiera się do badania. Rozmaz pobiera się za pomocą specjalnego wacika, który przesuwa się wzdłuż błon śluzowych, a następnie opuszcza do probówki z przygotowanym medium. Krew pobiera się do probówki, z palca lub żyły. Podczas pobierania rozmazów z cewki moczowej lub pochwy zaleca się powstrzymanie się od stosunków płciowych przez kilka dni.

Podczas pobierania materiału biologicznego do badań należy przede wszystkim zadbać o prawidłowe pobranie i sterylność. Ale w większości przypadków jest to troska personelu medycznego, pacjent nie powinien się tym martwić. Najczęściej do takich badań zwracają się ginekolodzy i urolodzy, w drugiej kolejności - otolaryngolodzy w leczeniu chorób nosogardła i gardła, górnych dróg oddechowych.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Technika testy wrażliwości na antybiotyki

Zebrany materiał biologiczny dostarczany jest do laboratorium w warunkach sterylnych, gdzie przeprowadzane są dalsze badania. Przede wszystkim przeprowadza się jego pierwotne wysiewanie na uniwersalne podłoża odżywcze. Część materiału pobiera się również do badania mikroskopowego. Przygotowuje się rozmaz do mikroskopii, przeprowadza się badanie, za pomocą którego można ustalić przybliżony obraz, założyć, jakie mikroorganizmy są obecne w próbce. Umożliwia to dobór najbardziej optymalnych środowisk do dalszych badań i identyfikacji mikroorganizmów. Ponadto na mikroskopie można zaobserwować oznaki wskazujące na stan zapalny, proces onkologiczny.

W ciągu kilku dni kolonie mikroorganizmów rosną w szalce Petriego. Następnie pobiera się kilka kolonii i przenosi na selektywne pożywki, które pozwalają na określenie przybliżonej grupy mikroorganizmów. Inkubuje się je przez kilka dni w termostacie, a następnie rozpoczyna się identyfikację (określenie rodzaju mikroorganizmu). Identyfikację przeprowadza się za pomocą specjalnych testów biochemicznych i genetycznych, identyfikatorów. Dodatkowo można przeprowadzić badania immunologiczne.

Po wyizolowaniu głównego patogenu ocenia się jego wrażliwość na antybiotyki. Istnieje kilka metod do tego celu. Najczęściej stosowaną metodą jest metoda rozcieńczeń seryjnych lub metoda dyfuzji krążkowej. Metody te są szczegółowo opisane w podręcznikach mikrobiologicznych, wytycznych i normach laboratoryjnych.

Istotą metody dyfuzji krążkowej jest to, że zidentyfikowane mikroorganizmy są wysiewane na pożywkę, a na wierzchu umieszczane są specjalne krążki nasączone antybiotykami. Wysiewanie jest inkubowane w termostacie przez kilka dni, a następnie mierzone są wyniki. Oceniany jest stopień zahamowania wzrostu bakterii przez każdy antybiotyk. Jeśli bakteria jest wrażliwa na antybiotyk, wokół krążka tworzy się „strefa lizy”, w której bakterie się nie rozmnażają. Ich wzrost jest powolny lub w ogóle nie występuje. Średnica strefy zahamowania wzrostu służy do określenia stopnia wrażliwości mikroorganizmu na antybiotyk i sformułowania dalszych zaleceń.

Metoda rozcieńczeń seryjnych jest najdokładniejsza. W tym celu mikroorganizmy wysiewa się na płynne podłoża odżywcze, dodaje antybiotyk rozcieńczony zgodnie z systemem rozcieńczeń dziesiętnych. Następnie probówki umieszcza się w termostacie w celu inkubacji przez kilka dni. Wrażliwość na antybiotyki określa się na podstawie stopnia wzrostu bakterii w bulionie odżywczym z dodatkiem antybiotyków. Rejestruje się minimalne stężenie, przy którym mikroorganizmy nadal rosną. Jest to minimalna dawka leku (konieczne jest przeliczenie z jednostek mikrobiologicznych na substancję czynną).

Są to standardowe metody mikrobiologiczne, które stanowią podstawę wszelkich badań. Wymagają one ręcznego wykonywania wszystkich manipulacji. Obecnie wiele laboratoriów jest wyposażonych w specjalistyczny sprzęt, który wykonuje wszystkie te procedury automatycznie. Specjalista pracujący z takim sprzętem potrzebuje jedynie umiejętności pracy ze sprzętem, przestrzegania zasad bezpieczeństwa i sterylności.

Należy wziąć pod uwagę, że wskaźniki wrażliwości w warunkach laboratoryjnych i w organizmach żywych różnią się znacznie. Dlatego osobie przepisuje się wyższą dawkę niż ustalona w trakcie badania. Wynika to z faktu, że organizm nie ma tak optymalnych warunków do rozwoju bakterii. W laboratorium powstają „idealne warunki”. Część leku może zostać zneutralizowana przez działanie śliny, soku żołądkowego. Część jest neutralizowana we krwi przez przeciwciała i antytoksyny wytwarzane przez układ odpornościowy.

Test wrażliwości na antybiotyki w moczu

Najpierw pobiera się materiał biologiczny. W tym celu należy pobrać środkową część porannego moczu i dostarczyć go do laboratorium. Ważne jest zachowanie sterylności i nie przyjmowanie antybiotyków przez kilka dni przed analizą, w przeciwnym razie można uzyskać fałszywie negatywny wynik. Następnie wykonuje się standardowy posiew, którego istotą jest wyizolowanie czystej kultury patogenu i wybranie antybiotyku, który będzie miał na niego optymalny wpływ bakteriobójczy. Określa się wymagane stężenie antybiotyku.

Analiza moczu jest najczęściej zalecana, gdy istnieje podejrzenie procesu infekcyjnego i zapalnego w układzie moczowo-płciowym, przy niedoborach odporności i zaburzeniach metabolicznych. Zazwyczaj mocz jest jałowym płynem. Czas trwania takiego badania wynosi 1-10 dni i jest określany przez szybkość wzrostu mikroorganizmu.

Badanie hodowli i wrażliwości na antybiotyki

Badanie polega na wyizolowaniu mikroorganizmu, który jest patogenem, do czystej kultury. Czasami może być kilka takich mikroorganizmów (zakażenie mieszane). Niektóre mikroorganizmy są zdolne do tworzenia biofilmów, które są rodzajem „społeczności mikrobiologicznych”. Wskaźnik przeżywalności biofilmów jest znacznie wyższy niż pojedynczych mikroorganizmów lub stowarzyszeń. Ponadto nie wszystkie antybiotyki są zdolne do wpływania na biofilm i penetracji go.

Aby określić patogen, wyizolować go do czystej kultury, wykonuje się wysiew. Podczas badania wykonuje się kilka wysiewów w różnych pożywkach. Następnie izoluje się czystą kulturę, określa się jej przynależność biologiczną i określa wrażliwość na leki przeciwbakteryjne. Wybiera się optymalne stężenie.

Do badania można użyć dowolnego materiału biologicznego, w zależności od choroby i lokalizacji procesu zakaźnego. Czas trwania jest określany przez tempo wzrostu mikroorganizmów.

[ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]

Test wrażliwości stolca

Kał bada się w różnych chorobach żołądka i jelit, w przypadku podejrzenia procesu zakaźnego, zatrucia bakteryjnego, zatrucia pokarmowego. Celem badania jest wyizolowanie patogenu i dobranie dla niego optymalnych leków przeciwbakteryjnych, które będą miały wysoką aktywność. Znaczenie tego typu badania polega na tym, że można wybrać lek, który będzie oddziaływał tylko na patogen i nie będzie oddziaływał na przedstawicieli prawidłowej mikroflory.

Pierwszym i bardzo ważnym etapem jest pobranie kału. Należy go pobrać rano do specjalnego sterylnego pojemnika. Należy go przechowywać nie dłużej niż 1-2 godziny. Kobiety z krwawieniem miesięcznym powinny odłożyć analizę do końca, ponieważ dokładność wyników ulegnie zmianie. Materiał jest dostarczany do laboratorium w celu wykonania badań. Analizę przeprowadza się przy użyciu standardowych technik mikrobiologicznych wysiewu i wyizolowania czystej kultury. Wykonuje się również antybiogram. Na podstawie wniosków opracowuje się zalecenia i ustala dalszy schemat badań.

[ 21 ], [ 22 ], [ 23 ], [ 24 ]

Analiza dysbakteriozy z czułością

Materiałem do badania są kały pobrane bezpośrednio po akcie defekacji. Normalna mikroflora przewodu pokarmowego składa się z przedstawicieli flory normalnej i kilku przedstawicieli flory chorobotwórczej. Ich skład gatunkowy, ilość i stosunek są ściśle określone i utrzymywane w granicach dopuszczalnej normy. Jeśli stosunek ten zostanie zaburzony, rozwija się dysbakterioza. Może ona objawiać się w różny sposób. Choroby zakaźne mogą rozwinąć się, jeśli ilość mikroflory chorobotwórczej gwałtownie wzrośnie. Jeśli ilość jakiegokolwiek mikroorganizmu gwałtownie spadnie, wolną przestrzeń zajmują inni przedstawiciele, którzy nie są typowi dla przewodu pokarmowego lub chorobotwórczy. Często wolną przestrzeń zajmuje grzyb, wówczas rozwijają się różne zakażenia grzybicze i kandydoza.

Aby określić skład ilościowy i jakościowy mikroflory jelitowej, wykonuje się analizę kału w kierunku dysbakteriozy. Konwencjonalnie wszystkich przedstawicieli żyjących w jelicie dzieli się na trzy grupy: patogennych, oportunistycznych i niepatogennych. W związku z tym analiza składa się z trzech części. Każda grupa mikroorganizmów ma własne zapotrzebowanie na źródło pożywienia, energię. Każda grupa wymaga osobnych pożywek i selektywnych dodatków.

Najpierw wykonuje się mikroskopię i wysiew pierwotny. Następnie, po wysiewie, wybiera się największe kolonie, podobne pod względem cech morfologicznych do przedstawicieli każdej grupy. Przenosi się je na selektywne podłoża. Po wyrośnięciu mikroorganizmy są identyfikowane i natychmiast testowane pod kątem wrażliwości na antybiotyki. Stosuje się standardowe metody mikrobiologiczne.

Badanie grupy patogennych mikroorganizmów, oprócz badań standardowych, obejmuje określenie bakterii duru brzusznego, paratyfusu i czerwonki. Określa się również, czy dana osoba jest nosicielem tych mikroorganizmów. Kompleksowe badanie dysbakteriozy obejmuje również badanie przedstawicieli grupy bifidobakterii i pałeczek kwasu mlekowego. Badanie trwa około tygodnia i zależy od tempa wzrostu mikroorganizmów.

[ 25 ], [ 26 ], [ 27 ], [ 28 ], [ 29 ]

Badanie wrażliwości bakteriofagów

W przypadku infekcji jelitowej, zamiast antybiotyków, do leczenia często stosuje się bakteriofagi. Bakteriofagi to wirusy bakteryjne, które są wrażliwe tylko na nie. Znajdują bakterię, z którą są komplementarne, przenikają do niej i stopniowo niszczą komórkę bakteryjną. W rezultacie proces zakaźny zostaje zatrzymany. Jednak nie wszystkie bakterie są wrażliwe na bakteriofagi. Aby sprawdzić, czy dany bakteriofag będzie wykazywał aktywność wobec przedstawicieli mikroflory, należy przeprowadzić analizę.

Materiałem do badania jest kał. Analiza musi zostać dostarczona do laboratorium w ciągu godziny, w przeciwnym razie nie będzie można jej przeprowadzić. Konieczne jest przeprowadzenie analizy w kilku powtórzeniach. Metoda początkowa jest podobna do tej stosowanej przy określaniu wrażliwości na antybiotyki. Najpierw wykonuje się wstępną mikroskopię próbki, następnie wysiew pierwotny na uniwersalne podłoża odżywcze. Następnie izoluje się czystą kulturę na selektywnych podłożach odżywczych.

Główna praca jest wykonywana na czystej kulturze. Są one traktowane różnymi typami bakteriofagów. Jeśli kolonia rozpuszcza się (liza), wskazuje to na wysoką aktywność bakteriofaga. Jeśli liza jest częściowa, bakteriofag działa umiarkowanie. W przypadku braku lizy możemy mówić o oporności na bakteriofaga.

Zaletą terapii fagowej jest to, że bakteriofagi nie wpływają na organizm człowieka i nie powodują skutków ubocznych. Przyczepiają się do pewnych typów bakterii i je lizują. Wadą jest to, że są bardzo specyficzne i mają selektywny wpływ, i nie zawsze mogą przyczepić się do bakterii.

[ 30 ], [ 31 ], [ 32 ], [ 33 ], [ 34 ], [ 35 ], [ 36 ], [ 37 ], [ 38 ]

Analiza plwociny w celu określenia wrażliwości na antybiotyki

Analiza jest badaniem wydzieliny z dolnych dróg oddechowych. Celem jest określenie rodzaju mikroorganizmów, które działają jako czynnik wywołujący chorobę. Wykonuje się również antybiogram. W tym przypadku określa się wrażliwość patogenu na antybiotyki i dobiera optymalne stężenie. Stosuje się go w przypadku chorób dróg oddechowych.

Badanie plwociny i innych treści płuc i oskrzeli jest niezbędne do wyboru schematu leczenia i różnicowania różnych diagnoz. Służy do potwierdzenia lub wykluczenia obecności gruźlicy.

Najpierw należy uzyskać materiał biologiczny. Można go uzyskać przez kaszel, odkrztuszanie lub pobranie go z tchawicy podczas bronchoskopii. Istnieją specjalne aerozole, które wspomagają odkrztuszanie. Przed pobraniem plwociny należy przepłukać usta wodą, co zmniejszy stopień zanieczyszczenia bakteryjnego jamy ustnej. Najpierw zaleca się wykonanie 3 głębokich wdechów i wywołanie produktywnego kaszlu. Plwocinę można również pobrać przez aspirację z tchawicy. W takim przypadku do tchawicy wprowadza się specjalny cewnik. Podczas bronchoskopii do jamy oskrzelowej wprowadza się bronchoskop. W tym przypadku błonę śluzową smaruje się środkiem znieczulającym.

Następnie materiał jest wysyłany do laboratorium w celu przeprowadzenia badań. Przeprowadzane jest standardowe posiewanie i mikroskopia. Następnie izolowana jest czysta kultura i przeprowadzane są dalsze manipulacje. Przeprowadzany jest antybiogram, który umożliwia identyfikację spektrum wrażliwości bakterii i dobór optymalnej dawki.

Jeśli podejrzewa się gruźlicę, przez trzy dni bada się poranną plwocinę. W przypadku badania na gruźlicę wynik będzie gotowy po 3-4 tygodniach. Ponieważ prątek gruźlicy, który jest czynnikiem wywołującym tę chorobę, rozwija się bardzo powoli.

Zwykle należy wykryć przedstawicieli prawidłowej mikroflory dróg oddechowych. Należy również wziąć pod uwagę, że przy obniżonej odporności wskaźniki prawidłowej mikroflory mogą się różnić.

Analiza nasienia w celu określenia wrażliwości na antybiotyki

Jest to badanie bakteriologiczne ejakulatu plemników z późniejszym doborem czułych antybiotyków i ich stężeń. Najczęściej przeprowadza się je w leczeniu niepłodności i innych chorób męskiego układu rozrodczego. W przypadku, gdy chorobie towarzyszy proces zakaźny. Główną przyczyną męskiej niepłodności w większości przypadków jest infekcja. Zazwyczaj początkowo wykonuje się spermogram. Na podstawie wyników ustala się zdolność zapładniającą plemników. Jeśli w tej analizie zostanie wykryta duża liczba leukocytów, możemy mówić o procesie zapalnym. W takim przypadku zwykle natychmiast przepisuje się analizę mikrobiologiczną, ponieważ stanowi zapalnemu prawie zawsze towarzyszy infekcja. Na podstawie uzyskanych wyników dobiera się odpowiednią terapię. Badanie zwykle przepisuje androlog.

Zapalenie gruczołu krokowego i choroby weneryczne są również powodami przeprowadzenia analizy. Jest ona również zalecana, jeśli u partnera zostanie wykryta choroba weneryczna.

Podstawą prawidłowej analizy jest przede wszystkim prawidłowe pobranie materiału biologicznego. Materiał pobiera się do specjalnych naczyń z szeroką szyjką. Temperatura przechowywania powinna odpowiadać temperaturze ciała człowieka. W takim przypadku materiał można przechowywać nie dłużej niż godzinę. W formie zamrożonej można go przechowywać nie dłużej niż dobę. Niewłaściwe jest pobieranie posiewu w trakcie przyjmowania antybiotyków, zmienia to obraz kliniczny. Zazwyczaj posiew wykonuje się przed rozpoczęciem kuracji antybiotykowej. Lub należy przerwać przyjmowanie leków na 2-3 dni przed analizą.

Następnie wysiewa się ją na pożywkę. Inkubuje w termostacie przez 1-2 dni. Następnie izoluje się czystą kulturę, a następnie przeprowadza się identyfikację, określa się wrażliwość, a także rodzaj i tempo wzrostu każdej kolonii. Wrażliwość na antybiotyki określa się, jeśli wykryto drobnoustroje chorobotwórcze. Średnio analiza trwa 5-7 dni.

[ 39 ], [ 40 ], [ 41 ], [ 42 ], [ 43 ]

Test na nietolerancję glutenu

Istnieje wiele testów, które można wykorzystać do określenia wrażliwości immunologicznej na różne substancje lub patogeny. Wcześniej główną metodą było przeprowadzanie testów opartych na reakcji aglutynacji przeciwciał i antygenów. Obecnie testy te są stosowane coraz rzadziej, ponieważ ich czułość jest znacznie niższa niż wielu nowoczesnych metod, takich jak testy na gluten. Najczęściej w praktyce uciekają się do testu śliny na gluten i analizy kału.

Test wrażliwości na gluten jest stosowany w celu diagnozowania różnych zaburzeń jelitowych. Opiera się na reakcji układu odpornościowego. Jeśli do stolca zostanie dodany gluten, reakcja występuje lub nie występuje. Jest to uważane za wynik fałszywie dodatni lub fałszywie ujemny. Wynik dodatni wskazuje na predyspozycję do zapalenia jelita grubego, wysokie prawdopodobieństwo jego rozwoju. Potwierdza również celiakię.

Możliwe jest również przeprowadzenie testu na gluten przy użyciu śliny jako materiału biologicznego. Można zmierzyć ilość przeciwciał przeciwko gliadynie. Wynik pozytywny wskazuje na wrażliwość na gluten. Może to wskazywać na wysokie prawdopodobieństwo cukrzycy. Jeśli oba testy są pozytywne, można potwierdzić cukrzycę lub celiakię.

[ 44 ], [ 45 ]

Test wrażliwości na antybiotyki w przypadku chlamydii

Analizę wykonuje się w leczeniu chorób zakaźnych i zapalnych układu moczowo-płciowego, w przypadku podejrzenia chlamydii. Materiał do badania stanowi zeskrobinę z błony śluzowej pochwy – u kobiet, wymaz z cewki moczowej – u mężczyzn. Pobranie odbywa się w sali zabiegowej przy użyciu sprzętu jednorazowego użytku. Ważne jest zachowanie sterylności. Przed pobraniem materiału należy powstrzymać się od współżycia przez 1-2 dni przed rozpoczęciem badania. Jeśli kobieta miesiączkuje, materiał pobiera się 3 dni po jej całkowitym zakończeniu.

Materiał dostarczany jest do laboratorium. Pełna analiza obejmuje wstępną mikroskopię rozmazu. Umożliwia to wizualne określenie mikroflory na podstawie cech morfologicznych i prawidłowy dobór pożywek. Zawartość śluzu, ropy i cząstek nabłonka może bezpośrednio lub pośrednio wskazywać na rozwój procesu zapalnego lub złośliwego zwyrodnienia komórek.

Następnie przeprowadza się wysiew pierwotny. Hodowlę inkubuje się przez kilka dni w termostacie, a identyfikację przeprowadza się na podstawie cech kulturowych. Następnie hodowlę przenosi się na selektywne podłoża odżywcze przeznaczone do hodowli chlamydii. Powstałe kolonie identyfikuje się za pomocą testów biochemicznych. Następnie określa się wrażliwość na antybiotyki za pomocą standardowych metod. Wybiera się najbardziej wrażliwy antybiotyk i jego stężenie. Do hodowli chlamydii potrzebne są specjalne podłoża opracowane specjalnie dla tego rodzaju mikroorganizmów, które zawierają wszystkie niezbędne substancje i czynniki wzrostu.

Możliwe jest również przeprowadzenie badania metodą biologiczną. W tym celu szczury zakaża się patogenem. W niektórych laboratoriach zamiast szczurów stosuje się specjalnie wyhodowaną hodowlę tkankową. Wynika to z faktu, że chlamydie są pasożytami wewnątrzkomórkowymi i do ich hodowli potrzebne są specjalne warunki. Następnie mikroorganizmy oznacza się metodą PCR. Aby określić wrażliwość, przeszczepia się je na selektywne podłoże odżywcze dla chlamydii, a po kilku dniach odnotowuje się wyniki. Oporność lub wrażliwość ocenia się na podstawie zahamowania procesu zakaźnego w komórkach.

[ 46 ], [ 47 ], [ 48 ], [ 49 ], [ 50 ], [ 51 ], [ 52 ], [ 53 ]

Ile czasu trwa wykonanie testu wrażliwości na antybiotyki?

Średnio analiza jest wykonywana w ciągu 5-7 dni. Niektóre analizy trwają dłużej. Na przykład przy diagnozowaniu gruźlicy trzeba czekać od 3 tygodni do miesiąca na wyniki. Wszystko zależy od tempa wzrostu mikroorganizmów. Często pracownicy laboratorium muszą radzić sobie z przypadkami, gdy pacjenci proszą o szybsze wykonanie analizy. I nawet oferują „dopłatę” za pilność. Jednak tutaj trzeba zrozumieć, że w tym przypadku nic nie zależy od działań asystenta laboratoryjnego. Zależy tylko od tego, jak szybko rośnie mikroorganizm. Każdy typ ma swoją własną, ściśle określoną szybkość wzrostu.

Normalna wydajność

Nie ma absolutnych uniwersalnych wartości norm dla wszystkich analiz. Po pierwsze, wartości te mogą się różnić dla każdego biotopu. Po drugie, są one indywidualne dla każdego mikroorganizmu. Oznacza to, że wartości norm dla tego samego mikroorganizmu, na przykład dla gardła i jelit, są różne. Tak więc, jeśli gronkowiec dominuje w gardle jako przedstawiciel normalnej mikroflory, to E. coli, bifido- i laktobakterie dominują w jelitach. Wartości dla tego samego mikroorganizmu w różnych biotopach mogą się również znacząco różnić. Na przykład, Candida może normalnie występować w określonej ilości w mikroflorze układu moczowo-płciowego. Nie występują one normalnie w jamie ustnej. Obecność Candida w jamie ustnej może wskazywać na ich sztuczne wprowadzenie z ich naturalnego środowiska.

Mocz, krew, płyn mózgowo-rdzeniowy to środowiska biologiczne, które normalnie powinny być sterylne, tj. nie powinny zawierać żadnej mikroflory. Obecność mikroflory w tych płynach wskazuje na silny proces zapalny, zakaźny, a także wskazuje na ryzyko rozwoju bakteriemii i sepsy.

Ogólnie rzecz biorąc, istnieje przybliżona klasyfikacja. Jednostką miary w mikrobiologii jest CFU/ml, czyli liczba jednostek tworzących kolonie w 1 mililitrze płynu biologicznego. Stopień zanieczyszczenia jest określany przez liczbę CFU i waha się w szerokim zakresie od 10 ¹ do 10 ^9. Zgodnie z tym 10 ¹ to minimalna liczba mikroorganizmów, 10 ⁹ to ciężki stopień zakażenia. Jednocześnie zakres do 10 ³ jest uważany za normalny, wszystkie wskaźniki powyżej tej liczby wskazują na patologiczne rozmnażanie się bakterii.

Jeśli chodzi o wrażliwość na antybiotyki, wszystkie mikroorganizmy dzielą się na oporne, średnio wrażliwe, wrażliwe. Wynik ten jest często wyrażany jako cecha jakościowa wskazująca MID - minimalną dawkę hamującą antybiotyku, która nadal hamuje wzrost mikroorganizmu. Dla każdej osoby, jak i dla każdego mikroorganizmu, wskaźniki te są ściśle indywidualne.

[ 54 ], [ 55 ], [ 56 ], [ 57 ]

Urządzenie do analizy

Przy prowadzeniu badań bakteriologicznych, zwłaszcza przy określaniu wrażliwości na antybiotyki, jedno urządzenie nie wystarczy. Niezbędne jest kompletne, kompleksowe wyposażenie laboratorium bakteriologicznego. Należy starannie zaplanować i dobrać sprzęt, który będzie odpowiadał każdemu etapowi badań. Na etapie pobierania materiału biologicznego niezbędne są sterylne instrumenty, pudełka, pojemniki, komory magazynowe i sprzęt transportowy do dostarczania materiału do laboratorium.

W laboratorium, przede wszystkim, będziesz potrzebować wysokiej jakości mikroskopu do mikroskopii rozmazowej. Obecnie istnieje duża liczba mikroskopów, które mają różnorodne właściwości - od tradycyjnych mikroskopów świetlnych po mikroskopy kontrastu fazowego i sił atomowych. Nowoczesny sprzęt pozwala skanować obraz w przestrzeni trójwymiarowej i badać go przy dużym powiększeniu z dużą dokładnością.

Na etapie zasiewania i inkubacji mikroorganizmów mogą być potrzebne autoklawy, szafy z suchym ciepłem, eksykatory, łaźnie parowe i wirówka. Wymagany jest termostat, w którym następuje główna inkubacja materiału biologicznego.

Na etapie identyfikacji mikroorganizmów i wykonywania antybiogramu niezbędne mogą okazać się mikromanipulatory, spektrometry masowe, spektrofotometry, kolorymetry do różnych obliczeń i oceny właściwości biochemicznych kultur.

Ponadto nowoczesne laboratoria mogą być wyposażone w sprzęt high-tech, który wykonuje wszystkie wyżej wymienione główne etapy badań, aż do obliczenia wyników w trybie automatycznym. Do takich urządzeń należy na przykład kompleksowe urządzenie laboratorium bakteriologicznego oparte na spektrometrze masowym czasu przelotu. Ta linia urządzeń umożliwia podzielenie całego terytorium laboratorium na trzy strefy. Pierwsza strefa jest brudna, gdzie testy są przyjmowane i rejestrowane. Druga strefa to strefa robocza, gdzie faktycznie przeprowadzane są główne badania mikrobiologiczne. A trzecia strefa to sterylizacja i autoklaw, gdzie przeprowadzane jest przygotowanie i utylizacja materiału roboczego.

Modele umożliwiają inkubację w szerokim zakresie temperatur i warunków. Zawiera wbudowany analizator krwi i innych próbek biologicznych, który zapewnia wyniki o wysokiej dokładności i niezawodności. Zestaw zawiera wagi elektroniczne, bidistillery, wirówki, autoklawy i szafy sterylizacyjne, automatyczny średni garnek, łaźnię wodną z wbudowanym mieszadłem, mierniki pH, termometry i mikroskopy.

Używa się również analizatora mikrobiologicznego, do którego umieszcza się próbki do badania, pożywki i zestawy testów do określania wrażliwości. Urządzenie wykonuje niezbędne badania i wydaje gotowy wniosek.

Podnoszenie i obniżanie wartości

Tylko lekarz może rozszyfrować analizę. Ale często pacjenci, otrzymawszy wyniki, wpadają w panikę, zauważając dużą liczbę niezrozumiałych symboli i liczb. Aby się nie zgubić, wskazane jest, aby mieć przynajmniej ogólne pojęcie o tym, jak rozszyfrować analizę wrażliwości na antybiotyki. Zazwyczaj pierwsza pozycja w wynikach wskazuje nazwę mikroorganizmu, który jest czynnikiem wywołującym chorobę. Nazwa jest podana po łacinie. Może również wskazywać przedstawiciela normalnej mikroflory, która panuje w organizmie, więc nie ma powodu do paniki. Druga pozycja wskazuje stopień zaszczepienia, czyli liczbę mikroorganizmów. Zazwyczaj liczba ta waha się od 10 ¹ do 10 ^9. Trzecia pozycja wskazuje formę patogenności, a czwarta - nazwy leków przeciwbakteryjnych, na które ten mikroorganizm jest wrażliwy. W pobliżu podano minimalne stężenie hamujące, przy którym wzrost mikroorganizmu jest hamowany.

[ 58 ], [ 59 ], [ 60 ], [ 61 ], [ 62 ], [ 63 ]