Hematopoetyczne komórki macierzyste

Krwiotwórczych komórek macierzystych (HSC), jak mezenchymalnych komórek progenitorowych charakteryzują multipotency i prowadzą do linii komórkowych, skończonych elementów, które tworzą komórki krwi i niektóre wyspecjalizowane komórki tkanki łącznej układu odpornościowego.

Hipoteza o istnieniu wspólnego przodka wszystkich krwinek, jak również określenie „stem cell”, należąca A. Maximov (1909) Potencjał tworzenie masy komórek z GSK ogromne -. Komórek macierzystych szpiku kostnego produkować 10. Komórek dziennie, które tworzą ciałka krwi samego urządzenia peryferyjnego. Istnienie krwiotwórczych komórek macierzystych, powstała w 1961 roku w eksperymentach dotyczących odzyskiwania hematopoezy u myszy otrzymujących dawki śmiertelnej dawki promieniowania, które niszczą komórki macierzyste szpiku kostnego. Pos tj przeszczep syngeniczne komórki szpiku kostnego tak napromieniane śmiertelnie zwierząt dyskretne ogniska hematopoezy wykryto w śledzionie odbiorców, których źródłem - pojedynczy klonogenicznego komórek progenitorowych.

Następnie wykazano zdolność krwiotwórczych komórek macierzystych do samopomocy, co zapewnia funkcję hematopoezy podczas ontogenezy. W procesie rozwoju embrionalnego HSC charakteryzują się wysoką aktywnością migracyjną, niezbędną do migracji do miejsc narządów krwiotwórczych. Ta własność HSC jest również zachowana w ontogenezie - ze względu na ich stałą migrację ma miejsce trwałe odnowienie puli komórek immunokompetentnych. Zdolność GSK do migracji, przenikania przez bariery histohematologiczne, implantacji w tkankach i wzrostu klonogennego służyła za podstawę do przeszczepu szpiku kostnego w szeregu chorób związanych z patologią układu krwiotwórczego.

Podobnie jak wszystkie zasoby komórek macierzystych, hematopoetyczne komórki macierzyste są obecne w niszy (szpiku kostnym) w bardzo małych ilościach, co powoduje pewne trudności w ich przydzielaniu. Immunofenotypowych HSC człowieka charakteryzują się komórki CD34 + NK, zdolne do migrowania do krwiobiegu i kolonizacji narządów układu odpornościowego lub ponownie napełnić zrębu szpiku kostnego. Należy wyraźnie rozumieć, że GSK nie jest najbardziej niedojrzałe komórki szpiku kostnego, i są otrzymywane z prekursorów, w tym dormantnye fibroblastów SB34-ujemnych komórek. Stwierdzono, że komórki o fenotypie CD34 są w stanie wejść do krwiobiegu, gdzie zmienia swój fenotyp w CD34 +, ale migracja powrotnego w szpiku kostnego pod wpływem mikrośrodowiska ponownie się elementami komórek macierzystych CD34-ujemnych. W spoczynku komórki CD34 nie reagują na paraboliczne regulacyjne sygnały zrębowe (czynniki wzrostu, cytokiny). Jednakże w sytuacjach wymagających intensywności amplifikacji krwiotwórczych komórek macierzystych z CD34 fenotyp odpowiedzi na sygnały różnicowania formie zarówno krwiotwórczych i mezenchymalnych komórek progenitorowych. Hematopoeza następuje przez bezpośredni kontakt z GSK elementów komórek zrębu szpiku kostnego przedstawiono złożoną sieć makrofagi, komórki śródbłonka, siatkowaty osteoblastów fibroblastów zrębowych, i macierzy zewnątrzkomórkowej. Zrębu szpiku kostnego ramy - nie tylko matrycy lub „szkielet” na tkance krwiotwórczej, niesie drobnych regulacji hematopoezy powodu parakrynnych sygnałów regulacyjnych czynników wzrostowych, cytokin i chemokin, a także zapewnia interakcje adhezyjne niezbędne do powstawania krwinek.

Tak więc podstawą stale aktualizowanego systemu hemopoeza jest hemopoetyczna komórka macierzysta, która jest zdolna do przedłużonej samoobsługi, jest polipotentna (z punktu widzenia hemopoeza). Podczas procesu zatwierdzania HSC ulegają pierwszorzędnemu różnicowaniu i tworzą klony komórek różniących się charakterystyką cytomorfologiczną i immunofenotypową. Kolejne tworzenie prymitywnych i zaangażowanych komórek progenitorowych jest zakończone przez tworzenie morfologicznie identyfikowalnych komórek przodków różnych linii krwiotwórczych. Wynikiem kolejnych etapów złożonego wielostopniowego procesu hematopoezy jest dojrzewanie komórek i uwalnianie do krwi obwodowej dojrzałych elementów - erytrocytów, leukocytów, limfocytów i płytek krwi.

[1], [2], [3], [4], [5]

Źródła hematopoetycznych komórek macierzystych

Hematopoetyczne komórki macierzyste są uważane za najbardziej badane źródło pnia, co w dużej mierze wynika z ich zastosowania w klinice do przeszczepu szpiku kostnego. Na pierwszy rzut oka wiele wiadomo o tych komórkach. Do pewnego stopnia, jest to prawda, ponieważ tymczasowe i dojrzałych potomstwo GSK - najbardziej atrakcyjnych składników komórkowych, z których każda (erytrocyty, leukocyty, limfocyty, monocyty / makrofagi i płytek krwi) są dokładnie badane na wszystkich poziomach - od światła, mikroskopii elektronowej, z charakterystyka biochemiczna i immunofenotypowa przed identyfikacją za pomocą analizy PCR. Jednakże monitorowanie prowadzone przez morfologicznych, biochemicznych, ultrastrukturalnymi immunofenotypowych i biofizycznych parametrów genomowego GSK nie przyniosła odpowiedzi na wiele problematycznych kwestii, których rozwiązanie konieczne dla rozwoju transplantacji komórek jest. To nie jest jeszcze ustalone mechanizmy stabilizacyjne GSK w stanie uśpienia, są aktywowane, wprowadź etap symetryczny lub asymetryczny podział, a co najważniejsze - z zaangażowaniem do edukacji jako funkcjonalnie różnych komórek krwi, erytrocytów, leukocytów, limfocytów i płytek krwi.

Obecność w komórkach szpiku kostnego z fenotypie CD34, które przodkowie zarówno mezenchymalnych i krwiotwórczych komórek macierzystych, powstał problem istnienia najbliższym końca do komórek CD34-ujemnych w różnicowaniu komórek prekursorowych i hematopoetycznych linii zrębu. Długotrwałe metody uprawy otrzymano w tzw długotrwałej hodowli „Stan komórki (długotrwałej hodowli komórek zapoczątkowujących - LTC-IC). Żywotność tych komórek progenitorowych tworzących kolonię aktywność zrębu szpiku kostnego oparte na kombinacji czynników wzrostu jest więcej niż 5 tygodni, podczas gdy żywotność przyznanych jednostek tworzących kolonie (CFU) na kulturze 3 tygodniach. Obecnie uważa się, że LTC-IC - funkcjonalny analog GCW jak repopulyatsionnom na wysokim potencjale wynoszącym około 20% LTC-IC charakteryzują fenotypie CD34 + CD38- i wykazują wysoką zdolność do samo-odnowy. Takie komórki ze szpiku kostnego człowieka do częstotliwości 1:50 000. Jednakże, należy rozumieć, komórki limfoidoinitsiiruyuschie szpikowego najbliżej HSC, które zostały uzyskane w warunkach długoterminowego (15 tygodni) kultury. Takie komórki są określane jako LTC między komórkami szpiku ludzkiego znajdują się w 10-krotnie niższa niż dla LTC-IC i jest utworzony jako mieloidalnych linii komórkowych i limfatycznej hemopoetycznych macierzystych.

Chociaż etykieta krwiotwórcze komórki macierzyste z monoklonalnymi przeciwciałami, a następnie identyfikację immunofenotypowych jest głównym sposobem identyfikacji i sortowaniem krwiotwórczych komórek macierzystych z potencjalnego zastosowania klinicznego dedykowanego GSK zatem ograniczony. Przeciwciała blokujące receptory CD34 albo innych antygenów, markerów podczas sortowania immunopozytywne nieuchronnie zmienia właściwości komórek wyizolowanych z nim. Bardziej korzystne jest immuno-ujemne wydzielanie HSC na kolumnach magnetycznych. Jednakże, w tym przypadku, stosuje się zazwyczaj sortowania monoklonalnych przeciwciał osadzonych na nośniku metali. Także, co ważne, zarówno metoda alokacji GSK na podstawie fenotypowych, zamiast cech funkcjonalnych. Dlatego wielu badaczy wolą korzystać z analizy parametrów klonogenne GSK, co pozwala na wielkość i skład kolonii w celu określenia stopnia zaawansowania i kierunku różnicowania komórek progenitorowych. Wiadomym jest, że w trakcie popełniania liczbę komórek i liczbę typów w koloniach jest zmniejszona. Krwiotwórczych komórek macierzystych, a jego komórki potomnej na początku, zwany „granulocytów i monocytów erytrocytów jednostka megakariotsitokolonieobrazuyuschaya” (SFU-GEMM) tworzenie kultury multilinear duże kolonie zawierające odpowiednio granulocyty, erytrocyty, monocyty i megakariocytów. Się poniżej jednostki linii granulocytów zaangażowanie linii monotsitokolonieobrazuyuschaya (SFU-GM) wytwarza kolonie granulocytów i makrofagów i granulocytów jednostek tworzących kolonie (SFU-g) - tylko małych kolonii granulocytów dojrzałych. Wczesne erytrocytów poprzednik - urządzenie burstoobrazuyuschaya czerwonych krwinek (SFU-E) - jest źródłem dużych bardziej dojrzałych krwinek czerwonych jednostka tworząca kolonię (SFU-E) - małych kolonii czerwonych krwinek. W ogólnej populacji, przy czym wzrost komórek w pożywce półstałej można zidentyfikować komórek tworzących sześć typów kolonii szpikowych: SFU-GEMM GM-SFU, SFU-G i M-SFU, VU-E, E-SFU).

Jednakże, oprócz pochodnych krwiotwórczych, każdy materiał źródłowy do rozdzielania HSC zawiera znaczną liczbę współdziałających komórek. W związku z tym konieczne jest wstępne oczyszczenie przeszczepu, przede wszystkim aktywnych komórek układu odpornościowego dawcy. Zazwyczaj stosuje się do tego immunosukcję opartą na ekspresji specyficznych antygenów limfocytów, co umożliwia izolowanie i usuwanie ich za pomocą przeciwciał monoklonalnych. Ponadto technika immunorozetochnaya limfocytów T zubożony przeszczep szpiku kostnego, która opiera się na powstawanie kompleksów limfocytów CD4 + i specyficznych przeciwciał monoklonalnych skutecznie usunąć za pomocą aferezie. Ta technika zapewnia oczyszczony materiał komórkowy z 40-60% hematopoetycznymi komórkami macierzystymi.

Zwiększenie liczby komórek progenitorowych w wyniku usunięcia dojrzałych komórek krwi od produktu leukaferezy uzyskuje się przez wirowanie w przeciwprądzie a następnie filtrację (w obecności środka chelatującego - cytrynian trójsodowy) przez kolumnę zawierającą pokryte włókna nylonowe ludzkiej immunoglobuliny. Konsekwentne stosowanie tych dwóch technik zapewnia całkowite oczyszczenie przeszczepu z płytek, 89% z erytrocytów i 91% z białych krwinek. Ze względu na znaczne zmniejszenie strat HSC, poziom komórek CD34 + w całkowitej masie komórek można zwiększyć do 50%.

Dla właściwości funkcjonalnych izolowanych hematopoetycznych komórek macierzystych wykorzystuje się ich zdolność do tworzenia kolonii dojrzałych elementów krwi w hodowli. Analiza utworzonych kolonii pozwala zidentyfikować i określić ilościowo typy komórek progenitorowych, stopień ich zaangażowania i ustalić kierunek ich różnicowania. Aktywność klonogenną określa się w podłożach półstałych na metylocelulozie, agarze, plazmie lub żelu fibrynowym, co zmniejsza aktywność migracji komórek, co zapobiega ich przywieraniu do powierzchni szkła lub plastiku. W optymalnych warunkach hodowli klony z pojedynczej komórki rozwijają się w ciągu 7-18 dni. Jeśli klon zawiera mniej niż 50 komórek, jest identyfikowany jako pojedynczy skup, jeśli liczba komórek przekracza 50 - jako kolonia. Uwzględnia się liczbę komórek zdolnych do tworzenia kolonii (jednostek tworzących kolonię - CFU lub komórek tworzących kolonie - COCs). Należy zauważyć, że parametry i CFU COC nie odpowiadać liczbie HSC w zawiesinie komórkowej, chociaż koreluje z tym ponownie podkreśla potrzebę identyfikacji funkcjonalnego (tworzących kolonię) aktywność HSC in vitro.

Wśród komórek szpiku kostnego krwiotwórcze komórki macierzyste mają najwyższy potencjał proliferacyjny, dzięki czemu w hodowli powstają największe kolonie. Przez liczbę takich kolonii proponuje się pośrednio określić liczbę komórek macierzystych. Po utworzeniu się kolonii in vitro przekraczającej 0,5 mm średnicy oraz z liczbą komórek 1000, autorzy badali stabilności tych komórek subletalnych dawek 5-fluorouracylu i badano ich zdolność do zasiedlają szpik kostny napromieniane śmiertelnie zwierząt. Zgodnie z tymi parametrami izolowane komórki nie różniły się znacznie od HSC i otrzymywały skrót oznaczający HPP-CFC - komórki tworzące kolonie o wysokim potencjale proliferacyjnym.

Trwają poszukiwania możliwości bardziej jakościowej selekcji hematopoetycznych komórek macierzystych. Jednakże, krwiotwórcze komórki macierzyste są morfologicznie podobne do limfocytów i są stosunkowo jednolity zbierania komórek z niemal okrągłe jąder chromatyny i cząstek slabobazofilnoy małej ilości cytoplazmie. Dokładna liczba jest również trudna do ustalenia. Zakłada się, że GSK w szpiku kostnym osoby występuje z częstotliwością 1 na 106 komórek zawierających jądra.

Identyfikacja hematopoetycznych komórek macierzystych

Aby poprawić identyfikację krwiotwórczych komórek macierzystych prowadzi się kolejno lub jednocześnie (na tere sorbitanu wielokanałowego) BADANIA membrannosvyazannyh spektrum antygenów, w których GSK fenotypie CD34 + CD38 powinny być połączone z brakiem znaczników różnicowania liniowych, zwłaszcza antygenom komórek immunokompetentnych, takich jak CD4 i immunoglobuliny powierzchniowo glikoporfina.

Praktycznie wszystkie schematy fenotypowania hematopoetycznych komórek macierzystych obejmują oznaczanie antygenu CD34. To glikoproteina o masie cząsteczkowej około 110 kDa, posiadające kilka miejsc glikozylacji ekspresji na błonie komórkowej, w osoczu po aktywacji genów zlokalizowanych na chromosomie 1. Funkcja cząsteczki CD34 jest związana z interakcją L-selektyny z wczesnymi krwiotwórczymi komórkami prekursorowymi z bazą zrębową szpiku kostnego. Należy jednak pamiętać, że obecność antygenu CD34 na powierzchni komórek tylko pozwala dokonać wstępnej oceny zawartości GSK w zawiesinie komórkowej, ponieważ ulega on ekspresji i inne krwiotwórcze komórki progenitorowe i komórki zrębu szpiku kostnego i komórki śródbłonka.

Podczas różnicowania hematopoetycznych komórek progenitorowych ekspresja CD34 ulega ciągłemu zmniejszeniu. Komórki progenitorowe erytrocytów, granulocytów i monocytów wykazują słabą ekspresję antygenu CD34 lub w ogóle nie występują na swojej powierzchni (fenotyp CD34). Na powierzchni błony zróżnicowanych komórek szpiku kostnego i dojrzałych komórek krwi nie wykryto antygenu CD34.

Należy zauważyć, że nie tylko w dynamice różnicowania hematopoetycznych komórek progenitorowych zmniejsza poziom ekspresji CD34, ale równolegle stopniowo zwiększoną ekspresję antygenu CD38 - integralną glikoproteiną błonową o masie cząsteczkowej 46 kDa, mającą NAD glikogidrolaznoy i aktywności cyklazy ADP-rybozyl, co sugeruje jego zaangażowanie w transporcie i syntezie ADP-rybozy. W ten sposób możliwe jest dwukrotne sprawdzenie stopnia zaangażowania krwiotwórczych komórek progenitorowych. Populację komórek o fenotypie CD34 + CD38 +, od 90 do 99% komórek szpiku CD34-pozytywnych komórek progenitorowych obejmuje z ograniczony potencjał proliferacyjny i różnicowania, podczas gdy w fenotypie komórki CD34 + CD38 może dochodzić rolę GSK.

Rzeczywiście, populacja komórek szpiku kostnego opisana wzorem CD34 + CD38- zawiera stosunkowo dużą liczbę prymitywnych komórek macierzystych, które mogą różnicować się w kierunku mieloidalnym i limfoidalnym. W kontekście uprawy długotrwałego fenotypu komórek CD34 + CD38- uda się uzyskać wszystkie dojrzałych krwinek: neutrofile, eozynofile, bazofile, monocyty, megakariocytów erytrocytów i limfocytów.

Stosunkowo niedawno stwierdzono, że komórki CD34-dodatnie wyrazić dwa więcej markerów - AC133 i CD90 (Thy-1), które są także wykorzystywane do identyfikacji krwiotwórczych komórek macierzystych. Thy-1 antygenu koekspresji z receptorem CD117 (C-kit) do komórek CD34 + w szpiku kostnym, krwi obwodowej i przewód. Ta powierzchnia fosfatidilinozitolsvyazyvayuschy glikoproteina o masie cząsteczkowej 25-35 kDa, które uczestniczy w procesach adhezji komórkowej. Niektórzy autorzy uważają, że antygen Thy-1 jest markerem najbardziej niedojrzałych komórek CD34-dodatnich. Replikacji komórek o fenotypie CD34 + Thy-1 + powodują długotrwałych hodowlach linii, tworząc komórki potomne. Sugeruje się, że antygen Thy-1 blokuje sygnały regulatorowe, które powodują zatrzymanie podziału komórki. Pomimo faktu, że komórki CD34 + TU1 + są zdolne do samoodnawiania oraz tworzenia długotrwałych hodowlach linii ich fenotyp nie może odnosić się wyłącznie do HSC jak Thy-1 + zawartość w całkowitej masie pierwiastków komórek CD34-dodatnich wynosi około 50%, znacznie przewyższające liczba komórek hematopoetycznych.

Bardziej obiecującą metodą identyfikacji hematopoetycznych komórek macierzystych jest AC133, marker antygenowy hematopoetycznych komórek progenitorowych, którego ekspresja została po raz pierwszy wykryta na embrionalnych komórkach wątroby. AC133 jest transbłonową glikoproteiną, która pojawia się na powierzchni błony komórkowej na najwcześniejszych etapach dojrzewania GSK - możliwe, że nawet wcześniej niż antygen CD34. W badaniach A. Petrenko i V. Grishchenko (2003) stwierdzono, że AC133 eksprymuje do 30% komórek CD34-dodatnich zarodkowej wątroby.

Tak więc, idealny profil fenotypowy krwiotwórczych komórek macierzystych przez obecnie koncepcji suma zarysu komórek w obiegu, które muszą być obecne CD34 antygenów konfiguracji, AC133 i Thy-1, ale nie ma miejsca na cząsteczkowej występy CD38, HLA-DR i markery liniowy różnicowanie GPA , CD3, CD4, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20.

Zmienność fenotypowego portretu HSC może być kombinacją CD34 + CD45RalowCD71low, ponieważ właściwości komórek opisanych tym wzorem nie różnią się od parametrów funkcjonalnych komórek o fenotypie CD34 + CD38. Ponadto, ludzki GSK można zidentyfikować za pomocą fenotypowych znaków CD34 + Thy-1 + CD38Iow / "c-kit / low" - tylko 30 z tych komórek całkowicie przywraca hematopoezę myszom napromienionym śmiertelnie.

Z analizy ogólnych cech fenotypu komórek szpiku kostnego faktycznie rozpoczął 40 lat intensywnych badań GSK jednocześnie zdolnego zarówno do samoodnowy i różnicowania do innych elementów komórkowych, pozwalając, aby uzasadnić stosowanie transplantacji szpiku kostnego w leczeniu różnych schorzeń układu hemopoetycznych. Ostatnio odkryte nowe typy komórek macierzystych nie były jeszcze szeroko stosowane w praktyce klinicznej. Jednakże, komórki macierzyste z pępowiny (rdzenia), krwi, wątrobie płodu można znacznie rozszerzyć transplantacji komórek, nie tylko w hematologii, ale również w innych dziedzinach medycyny, jako różne od HSC szpiku kostnego jako ilościowe i jakościowe właściwości wydajności.

Przemieszczenie masy komórek macierzystych układu krwiotwórczego konieczne do przeszczepu uzyskuje się zazwyczaj ze szpiku kostnego, krwi obwodowej i rdzenia, a także zarodka wątroby. Ponadto, hematopoetyczne komórki progenitorowe można otrzymać przez rozmnażania in vitro ESC i następnie ich różnicowanie w hematopoetycznych ukierunkowanych elementów komórkowych. A. Petrenko, V. Grishchenko (2003) słusznie podkreślają znacznym zróżnicowaniem właściwości immunologiczne i zdolność do przywrócenia hematopoezy GSK różnym pochodzeniu, z powodu nierównego stosunku zawartych w ich źródeł pluripotencjalne wcześnie i później zaangażowanych prekursorów. Ponadto, hematopoetyczne komórki macierzyste, pochodzące z różnych źródeł macierzystych, znamienny ilościowo i jakościowo bardzo różnych związków komórek krwiotwórczych.

Tradycyjnym źródłem hematopoetycznych komórek macierzystych jest szpik kostny. Zawiesinę komórek szpiku kostnego uzyskuje się z kości brzusznej lub mostka przez ługowanie pod znieczuleniem miejscowym. Tak otrzymana zawiesina jest niejednorodna i zawiera mieszaninę HSC, elementów komórek zrębowych, komórek progenitorowych linii mieloidalnych i limfoidalnych, jak również dojrzałych elementów krwi. Liczba komórek o fenotypach CD34 + i CD34 + CD38 wśród komórek jednojądrzastych szpiku kostnego wynosi odpowiednio 0,5 do 3,6 i 0 do 0,5%. Krew obwodowa po wywołanej G-CSF mobilizacji HSC zawiera 0,4-1,6% CD34 + i 0-0,4% CD34 + CD38.

Wykrycia i 0-0.6 OD-2,6%, a ich maksymalna liczba spośród krwiotwórczych płodowych komórek wątroby - - wyższy odsetek komórek CD34 + CD38 + i CD34 immunofenotypu krwi pępowinowej i 2,3 0,2-12,5 -35.8%, odpowiednio.

Jednakże jakość materiału przeszczepu zależy nie tylko od ilości zawartego w nim od komórek CD34 +, ale również od ich funkcjonalną aktywność, co można oszacować na podstawie stopnia tworzenia kolonii in vivo (odnowienia populacji szpikowej napromieniane śmiertelnie zwierząt) i in vitro - wzrostu kolonii na nośniku półstałych . Stwierdzono, że kolonia formowania i aktywność proliferacyjną krwiotwórczych komórek progenitorowych w fenotypie CD34 + CD38 HLA-DR, wyizolowanych z wątroby płodowej płodu szpiku kostnego i krwi pępowinowej i znacznie przewyższa zdolności proliferacyjnej krwiotwórczych tworzących kolonie komórek szpiku kostnego i krwi obwodowej osób dorosłych. Ilościowa i jakościowa analiza GSK różnego pochodzenia wykazała istotne różnice w zawartości względnej w zawiesinie komórkowej, i funkcjonalności. Maksymalna liczba komórek CD34 + (24,6%) obserwowano w materiałach szczepów pochodzących z płodów szpiku kostnego. Szpik kostny dorosłego człowieka zawiera 2,1% komórek CD34-dodatnich. Spośród jednojądrzastych komórek ludzkiej krwi obwodowej dla dorosłych tylko 0,5% ma fenotyp CD34 +, zaś ich ilość krwi pępowinowej osiągnięcia 2%. W ten sposób tworzących kolonię zdolność komórek CD34 + komórek płodowego szpiku kostnego przez 2,7 razy większa niż pojemność klonalnej wzrostu krwiotwórczym szpiku kostnym dorosłego ludzkich komórek i komórek krwi pępowinowej forma znacznie większe kolonie niż elementy krwiotwórczych izolowanych z krwi obwodowej osób dorosłych: 65,5 do 40, a , 8 kolonii / 105 komórek, odpowiednio.

Różnice w aktywności proliferacyjnej i zdolności tworzenia kolonii krwiotwórczych komórek macierzystych wiążą się nie tylko z różnymi stopniami dojrzałości, ale także z ich naturalnym mikrośrodowiskiem. Wiadome jest, że natężenie proliferacji i różnicowania komórek macierzystych prędkością określoną przez integralny wpływu regulacyjnego układu wieloskładnikowego czynników wzrostowych i cytokin, które są wytwarzane zarówno przez komórki macierzyste i elementów komórkowych macierzy zrębu mikrośrodowiska. Stosujący oczyszczone populacje komórek i bez surowicy w celu hodowli komórkowej daje Określony czynniki wzrostu, które mają działanie stymulujące i hamujące działania na komórki macierzyste różnych poziomach, komórki progenitorowe i komórki popełnianych w danym kierunku liniowym. Wyniki przeprowadzonych badań przekonująco świadczą o tym, że GSK uzyskany ze źródeł o różnych poziomach rozwoju ontogenetycznego różni się zarówno fenotypowo, jak i funkcjonalnie. W przypadku GSK pozostaje na wcześniejszych etapach ontogenezy, charakteryzującej się wysokim potencjałem reprodukcji własnej i wysokiej aktywności proliferacyjnej. Takie komórki są rozróżniane przez dłuższą długość telomerów i są poddawane angażowaniu w tworzenie wszystkich linii komórek krwiotwórczych. Reakcja układu odpornościowego na zarodkowe pochodzenie HSC jest opóźniona, ponieważ takie komórki łagodnie wyrażają cząsteczki HLA. Istnieje wyraźna gradacja względnej zawartości HSC i ich zdolność do samodzielnego odnowienia i liczba linii tworzą rodzaje zaangażowania: komórki CD34 + wątroby płodu> komórek CD34 + z krwi pępowinowej> CD34 + w szpiku kostnym. Ważne jest, że różnice te nie są specyficzne dla wewnątrz- i neo postanatalnomu wczesnym okresie rozwoju ludzi, ale również w całej ontogenezy - rozrostowych i tworzących kolonię aktywność HSC pochodzące ze szpiku kostnego lub krwi obwodowej dorosłego, odwrotnie proporcjonalna do wieku dawcy.