Mikroskopia konfokalna

Mikroskopia konfokalna jest obecnie uważana za jedną z najbardziej obiecujących metod obrazowania skóry in vivo, co wyjaśnia, dlaczego zainteresowanie nią jest niezwykle duże, zarówno wśród lekarzy klinicystów, jak i przedstawicieli instytutów badawczych.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Możliwości mikroskopii konfokalnej

W dermatologii mikroskopia konfokalna laserowa wykorzystywana jest do:

• badanie przenikania związków w głąb skóry (drogi przenikania, kinetyka, dystrybucja w skórze);
• obserwacja pracy gruczołów (określenie stanu czynnego i biernego);
• badania mikrokrążenia (również w czasie rzeczywistym);
• diagnostyka nowotworów.

Nie wdając się w rozważania na temat zalet i wad wyżej wymienionych rodzajów mikroskopii konfokalnej, zauważymy, że w ostatnich latach coraz większą popularnością cieszy się konfokalna mikroskopia laserowa z wykorzystaniem fluorescencji.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Mikroskopia konfokalna do badania skóry

Mikroskop konfokalny zapewnia dwie nieocenione możliwości - badanie tkanek na poziomie komórkowym w stanie fizjologicznej aktywności życiowej oraz demonstrację wyników badania (tj. aktywności komórkowej) w czterech wymiarach - wysokości, szerokości, głębokości i czasie. Dla jakości obrazu i głębokości badania najważniejszą rolę odgrywa zdolność tkanki do przepuszczania światła, innymi słowy jej przezroczystość. Metoda mikroskopii konfokalnej jest bezkontaktowa, wiązka światła nie powoduje żadnej szkody ani dyskomfortu u badanego pacjenta ani u zwierzęcia doświadczalnego.

Mikroskopia laserowa skaningowa konfokalna (CSLM) jest używana do badania skóry. Metoda ta pozwala zobaczyć naskórek i warstwę brodawkowatą skóry właściwej z rozdzielczością zbliżoną do histologicznej. Wszystkie wyniki badania są wyświetlane na monitorze i zapisywane jako pakiet plików graficznych (jako mikrofilm (w dynamice) lub mikrofotografie).

Istnieją dwa rodzaje tej metody:

• refleksyjna (współczynnik odbicia CSLM) – opiera się na fakcie, że różne struktury wewnątrzkomórkowe i międzykomórkowe mają różne współczynniki załamania światła, co pozwala na uzyskanie obrazu kontrastowego.
• fluorescencja (fluorescencja CSLM) - wykorzystuje światło laserowe, które przenika przez skórę i pobudza w niej egzo- lub endochromofory, które w odpowiedzi zaczynają emitować fotony (czyli fluorescencyjnie).

Rozdzielczość boczna to minimalna odległość między punktami położonymi na płaszczyźnie poziomej, tj. płaszczyźnie równoległej do powierzchni skóry. Rozdzielczość osiowa to minimalna odległość między punktami położonymi na płaszczyźnie prostopadłej do powierzchni skóry.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Historia mikroskopii konfokalnej

Pomysł stworzenia mikroskopu zdolnego do pokazania przekroju żywej tkanki na poziomie komórkowym był aktywnie rozwijany 130 lat temu. Głównym elementem współczesnych mikroskopów został zaprojektowany pod koniec XIX wieku i był obracający się dysk z maleńkimi otworami ułożonymi w spiralę. Dysk ten został wynaleziony w 1883 roku przez niemieckiego studenta Paula Nipkowa, od którego pochodzi jego nazwa - dysk Nipkowa (lub dysk Nipkowa). Wynalazek opierał się na zdolności światła, przechodzącego przez maleńkie otwory w dysku i soczewkę powiększającą, do wnikania głęboko w tkankę i oświetlania fragmentu komórki w pewnej odległości od powierzchni. Gdy dysk obraca się szybko, fragmenty tworzą pojedynczy obraz. Odsuwając strukturę od obiektu lub zbliżając ją do niego, można zmieniać głębokość optycznego przekroju badanej tkanki.

Dopiero pojawienie się rejestratorów wideo w latach 80. XX wieku oraz komputerów zdolnych do przetwarzania obrazów na początku lat 90. XX wieku umożliwiło stworzenie i efektywne wykorzystanie nowoczesnych mikroskopów, z których korzystamy do dziś.