PCR wirusowego zapalenia wątroby typu C

Wirus HCV zazwyczaj nie występuje w tym materiale.

W przeciwieństwie do serologicznych metod diagnostyki wirusowego zapalenia wątroby typu C, które wykrywają przeciwciała przeciwko HCV, PCR pozwala wykryć obecność HCV RNA bezpośrednio i określić jego stężenie w materiale badanym. Test ma specyficzność gatunkową i wysoką czułość: do jego wykrycia wystarczy dziesięć cząsteczek HCV RNA w materiale badanym. Wykrycie przeciwciał przeciwko HCV potwierdza jedynie fakt zakażenia pacjenta, ale nie pozwala ocenić aktywności procesu zakaźnego (replikacji wirusa) i prognozy choroby. Ponadto przeciwciała przeciwko HCV są wykrywane zarówno we krwi pacjentów z ostrym i przewlekłym zapaleniem wątroby, jak i u tych pacjentów, którzy byli chorzy i wyzdrowieli, a często przeciwciała we krwi pojawiają się dopiero kilka miesięcy po wystąpieniu obrazu klinicznego choroby, co komplikuje diagnozę. Wykrycie HCV we krwi za pomocą PCR jest bardziej informatywną metodą diagnostyczną. Wykrycie HCV RNA w PCR wskazuje na wiremię, pozwala ocenić replikację wirusa w organizmie i służy jako jedno z kryteriów skuteczności terapii przeciwwirusowej. Wykrycie HCV RNA metodą PCR na wczesnych etapach zakażenia wirusowego przy całkowitym braku jakichkolwiek markerów serologicznych może służyć jako najwcześniejszy dowód zakażenia. Jednak izolowane wykrycie HCV RNA przy całkowitym braku jakichkolwiek innych markerów serologicznych nie może całkowicie wykluczyć fałszywie dodatniego wyniku PCR. W takich przypadkach konieczna jest kompleksowa ocena badań klinicznych, biochemicznych i morfologicznych z wielokrotnym potwierdzeniem obecności zakażenia metodą PCR.

Zastosowanie metody PCR u pacjentów z przewlekłym wirusowym zapaleniem wątroby typu C ma ogromne znaczenie, ponieważ u większości z nich brakuje korelacji między obecnością replikacji wirusa a aktywnością enzymów wątrobowych. W takich przypadkach tylko PCR pozwala nam ocenić obecność replikacji wirusa, zwłaszcza jeśli końcowy wynik jest wyrażony ilościowo. W większości przypadków choroby zanik HCV RNA z surowicy krwi następuje później niż normalizacja enzymów wątrobowych, więc ich normalizacja nie może być podstawą do przerwania leczenia przeciwwirusowego.

Praktycznie ważne jest, aby badać nie tylko surowicę krwi, ale także limfocyty i próbki hepatobiopsji metodą PCR w celu wykrycia HCV RNA. Wirusy można wykryć 2-3 razy częściej w tkance wątroby niż w surowicy krwi. Oceniając wyniki badania surowicy krwi w kierunku HCV RNA, należy pamiętać, że wiremia może mieć charakter fluktuacyjny (podobnie jak zmiany w aktywności enzymów). Dlatego po pozytywnych wynikach badania PCR można uzyskać wynik negatywny i odwrotnie. W takich przypadkach lepiej jest zbadać próbki hepatobiopsji, aby rozwiać wszelkie wątpliwości, które się pojawiają.

Wykrywanie HCV RNA w materiale metodą PCR stosuje się w następujących celach:

• rozwiązanie wątpliwych wyników badań serologicznych;
• różnicowanie wirusowego zapalenia wątroby typu C od innych postaci zapalenia wątroby;
• określenie ostrego stadium choroby w porównaniu z poprzednim zakażeniem lub kontaktem; określenie stadium zakażenia noworodków urodzonych przez matki zakażone wirusem HCV;
• monitorowanie skuteczności leczenia przeciwwirusowego.

Pacjenci z podejrzeniem wirusowego zapalenia wątroby typu C:

• darczyńcy;
• osoby z czynnikami ryzyka;
• osoby z podwyższoną aktywnością ALT;
• pacjenci z ostrym zapaleniem wątroby

Wszystkie wyżej wymienione cechy oceny wyników i podejścia do diagnostyki HCV metodą PCR odnoszą się także do innych zakażeń.

Metoda PCR pozwala nie tylko wykryć HCV RNA w badanym materiale, ale także ustalić jego genotyp. Określenie genotypu wirusa ma duże znaczenie dla doboru pacjentów z przewlekłym wirusowym zapaleniem wątroby typu C do leczenia interferonem alfa i rybawiryną. Wskazania laboratoryjne do leczenia przewlekłego wirusowego zapalenia wątroby typu C interferonem alfa są następujące:

• zwiększona aktywność aminotransferaz;
• obecność HCV RNA we krwi;
• Genotyp 1 wirusa WZW typu C;
• wysoka wiremia we krwi (powyżej 8×105 ^kopii /ml).

Obecnie możliwe jest ilościowe określenie zawartości HCV RNA w surowicy krwi metodą PCR, co ma duże znaczenie dla monitorowania leczenia interferonem alfa. Poziom wiremii ocenia się następująco: przy zawartości HCV RNA od 10 ² do 10 ⁴ kopii/ml - słaby; od 10 ⁵ do 10 ⁷ kopii/ml - średni, powyżej 10 ⁸ kopii/ml - wysoki. Przy skutecznym leczeniu poziom wiremii obniża się.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]