Ekspert medyczny artykułu
Nowe publikacje
PCR jako metoda diagnozowania chorób genetycznych
Ostatnia recenzja: 04.07.2025
Cała zawartość iLive jest sprawdzana medycznie lub sprawdzana pod względem faktycznym, aby zapewnić jak największą dokładność faktyczną.
Mamy ścisłe wytyczne dotyczące pozyskiwania i tylko linki do renomowanych serwisów medialnych, akademickich instytucji badawczych i, o ile to możliwe, recenzowanych badań medycznych. Zauważ, że liczby w nawiasach ([1], [2] itd.) Są linkami do tych badań, które można kliknąć.
Jeśli uważasz, że któraś z naszych treści jest niedokładna, nieaktualna lub w inny sposób wątpliwa, wybierz ją i naciśnij Ctrl + Enter.
PCR jest nowym osiągnięciem genetyki molekularnej, stosowanym do amplifikacji DNA i pozwala na szybkie namnożenie in vitro określonego regionu DNA (tj. dowolnego genu będącego przedmiotem zainteresowania) ponad 200 000 razy. Do przeprowadzenia reakcji wystarczy mieć materiał DNA z jednej komórki; ilość DNA amplifikowanego metodą PCR jest tak duża, że DNA to można po prostu zabarwić (nie jest wymagane stosowanie radioaktywnych sond po elektroforezie). Warunkiem wstępnym przeprowadzenia PCR jest znajomość sekwencji nukleotydowej amplifikowanego regionu DNA w celu prawidłowego doboru sztucznie syntetyzowanych primerów.
Obecnie PCR jest procesem jednoprobówkowym, składającym się z powtarzanych cykli amplifikacji (reprodukcji, kopiowania) określonej sekwencji cząsteczki DNA w celu uzyskania wystarczająco dużej liczby kopii, które można zidentyfikować za pomocą elektroforezy. Jednym z kluczowych składników reakcji są „primery” – syntetyczne oligonukleotydy składające się z 20–30 zasad komplementarnych do „miejsc” (obszarów) wyżarzania (przyłączenia) na zidentyfikowanym obszarze matrycy DNA.
PCR zachodzi automatycznie w programowalnym termostacie - termocyklerze (wzmacniaczu). Trzystopniowy cykl, w wyniku którego powstają dokładne kopie zidentyfikowanego fragmentu DNA matrycowego, powtarzany jest 30-50 razy zgodnie z określonym programem termocyklera. W pierwszym cyklu oligoprimery hybrydyzują z oryginalnym DNA matrycowym, a następnie (w kolejnych cyklach) z nowo syntetyzowanymi cząsteczkami DNA, które kumulują się w mieszaninie reakcyjnej. W tym ostatnim przypadku synteza DNA kończy się nie na skutek zmiany temperatury, ale po osiągnięciu granicy polimerazy DNA amplifikowanego fragmentu, która określa wielkość nowo syntetyzowanego fragmentu DNA z dokładnością do jednego nukleotydu.
Elektroforezę stosuje się jako metodę wykrywania uzyskanych cząsteczek DNA, za pomocą której amplifikowany materiał rozdziela się na podstawie wielkości amplikonów (produktów amplifikacji).
PCR można stosować zarówno do bezpośredniego badania lokalizacji podejrzewanych mutacji lub miejsc polimorficznych, jak i do badania obecności innych specyficznych cech DNA.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]