Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) w diagnostyce chorób zakaźnych

PCR - jedną z metod diagnostyki DNA umożliwiających zwiększenie liczby kopii wykrywalnego fragmentu genomu (DNA), bakterii i wirusów jest milion razy stosując enzym polimeraza DNA. Test na tym segmencie genomowego kwasu nukleinowego wielokrotnie mnożone (amplifikowany), który pozwala na jego identyfikację. Po pierwsze, cząsteczki DNA bakterii lub wirusów przez ogrzewanie podzielona na dwa łańcuchy, a następnie w obecności zsyntetyzowane startery DNA (sekwencja nukleotydów specyficzne dla określonego genomowego) wiąże ich z odpowiednimi odcinkami DNA syntetyzowane drugą nić kwasu nukleinowego, po każdego startera w obecności termostabilnej polimerazy DNA , Okazuje się, że dwie cząsteczki DNA. Proces jest powtarzany wielokrotnie. Dla diagnostyki tylko jedna cząsteczka DNA, to znaczy jedna bakteria lub cząstek wirusów. Dodatkowy etap reakcji - synteza DNA w cząsteczce RNA przy użyciu enzymu odwrotnej transkryptazy - pozwoliła sprawdzić, wirusów RNA, takich jak wirus HCV. PCR - trzyetapowy proces, powtarzające się cykle denaturacji, przyłączania starterów do syntezy DNA (polimeryzacji). Ilość DNA syntetyzowane identyfikowano za pomocą testu ELISA lub elektroforezy.

PCR można stosować w różnych materiałów biologicznych - surowicę lub osocze krwi, wymazu z cewki moczowej, biopsji, płynu opłucnowego, płynu mózgowo-rdzeniowego, etc. Pierwszy PCR użyte do diagnozowania chorób zakaźnych, takich jak wirusa zapalenia wątroby typu B, wirusowego zapalenia wątroby typu C i wirusa zapalenia wątroby typu D, infekcji CMV, zakaźnych przenoszonych drogą płciową, zakażenia (rzeżączki, śmieci diynaya, Mycoplasma, zakażenie Ureaplasma), gruźlicy, HIV -infektsiya etc.

Zaletą PCR w diagnostyce chorób zakaźnych nad innymi metodami badań jest:

• czynnik wywołujący infekcję można znaleźć w dowolnym biologicznym środowisku organizmu, w tym w materiale uzyskanym w wyniku biopsji;
• Możliwe jest zdiagnozowanie chorób zakaźnych na najwcześniejszych etapach choroby;
• Możliwe jest ilościowe oszacowanie wyników badań (ile wirusów lub bakterii znajduje się w badanym materiale);
• wysoka czułość metody; na przykład, czułość PCR w celu wykrycia DNA wirusa zapalenia wątroby typu B w krwi wynosi 0,001 pg / ml (około 4 x 10 ² kopii / ml), podczas gdy czułość metody hybrydyzacji DNA za pomocą rozgałęzione sond - 2,1 pg / ml (w przybliżeniu 7 × 10 ⁵ kopii / ml).

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8]