Immunofenotypowanie hemoblastoz

Znaczny postęp w badaniach hematologicznych zrzeszonych w ostatnich latach przy wykorzystaniu nowoczesnych metod immunologicznych oraz zautomatyzowanych narzędzi do analizowania i sortowania komórek krwi obwodowej i szpiku kostnego - cytometrach przepływowych. Tradycyjne morfologiczne i Cytochemiczne badania choroby komórek podłoże (krew, czerwony szpiku kostnego, węzłów chłonnych, śledziony, itd.), W wielu przypadkach, zwłaszcza w przypadku chorób limfoproliferacyjnych, nie ujawniają cały szereg możliwości między morfologicznie podobne formy i identyfikacji pochodzenia patologicznego klonu . Problemy te można rozwiązać jedynie poprzez badanie charakterystyki immunologicznej komórek. Każdy etap różnicowania komórek krwiotwórczych ma swój własny zestaw antygenów, które są na międzynarodowej klasyfikacji zwanej różnicowania i różnicowania są podzielone na klastry, wyznaczonego CD.

Na różnicowanie bloku zmian nowotworowych może wystąpić w dowolnym stadium normalnego rozwoju komórek, w wyniku patologicznej klonu komórek określenie choroby podłoża i o takich samych immunologiczne (lub cechę fenotypową). Po Badania tych markerów komórek można określić dowolną formę lub rozwiązaniu choroby są zgodne, to jest na podstawie immunologicznej diagnostyce różnicowej fenotypie komórki, która jest najtrudniejsza zaburzeń limfoproliferacyjnych, ponieważ głównym podłoża komórek patologicznych prawie ten sam typ komórek, morfologii.

Fenotypowanie umożliwia zastosowanie przeciwciała monoklonalne charakteryzuje komórek blastycznych i dojrzałych komórek mieloidalnych krwi, mono-, chłoniaki szeregowo w obecności antygenów różnicowania (receptorów) w ścianie komórkowej. W części "Ocena statusu immunologicznego organizmu" częściowo opisano charakterystykę i znaczenie diagnostyczne markerów komórkowych; Poniżej znajduje się krótki opis markerów komórek antygenowych stosowanych w diagnostyce hemoblastozy. Na błonach komórek krwi i czerwonym szpiku kostnym można zidentyfikować następujące antygeny (markery).

• CD2 jest monomeryczną, transbłonową glikoproteiną. Jest obecny na powierzchni wszystkich krążących limfocytów T i niektórych limfocytów NK. CD2 bierze udział w procesie alternatywnej aktywacji limfocytów T. Wykrywanie CD2 za pomocą przeciwciał monoklonalnych w praktyce klinicznej stosuje się do fenotypowania ostrych białaczek z komórek T, chłoniaków, przewlekłych stanów zapalnych i niedoborów odporności.
• CD3 - kompleks białkowy związany z antygenowo specyficznym receptorem komórek T, jest głównym funkcjonalnym markerem limfocytów T. Ułatwia transfer sygnału aktywacyjnego z błony do cytoplazmy komórki. Wykrywanie CD3 jest wskazane w diagnostyce ostrej białaczki limfocytowej T, chłoniaka (CD3 nie ulega ekspresji w guzach limfatycznych niezwiązanych z limfocytami T) i chorób niedoboru odporności.
• CD4 - glikoproteiną ekspresji podzbioru komórek T pomocniczych (cewek) stanowiącej 45% limfocytów krwi obwodowej. We wczesnych stadiach rozwoju limfocytów w grasicy, antygeny CD4, a także CD8, ulegają ekspresji we wszystkich limfocytach korowych. Rdzeniowych tymocytów, który jest podobny do fenotypu dojrzałych komórek T krwi obwodowej (komórki pomocnicze T CD4 +), albo już wyrażają receptory CD4 lub CD8. W krwi obwodowej do 5% komórek jest jednocześnie znakowanych CD4 i CD8. W niektórych komórkach monocytów możliwa jest lekka ekspresja CD4. CD4 ulega ekspresji w większości przypadków, chłoniaka z limfocytów T, w tym ziarniniaka grzybiastego i białaczki komórek T, HTLV-związany (HTLV - wirus T-limfocytotropowy człowieka - HTLV).
• CD5 - jednołańcuchowa glikoproteina, obecna na wszystkich dojrzałych limfocytach T i większości tymocytów, jest słabo wyrażana przez limfocyty B. CD5 wykrywa się na komórkach nowotworowych przewlekłej białaczki limfocytowej z limfocytów B i chłoniaka centro-cytowego. W innych typach złośliwych chorób limfatycznych - chłoniaka grudkowego, białaczki włochatokomórkowej, chłoniaka wielkokomórkowego - CD5 nie ulega ekspresji.
• CD7 jest jednoniciowym białkiem, najwcześniejszym markerem różnicowania komórek T. Jest ekspresjonowany przez limfocyty T-T, nawet przed migracją do grasicy. CD7 wykrywa się na większości komórek NK, słabą ekspresję obserwuje się na monocytach. Limfocyty B i granulocyty nie zawierają tego antygenu. Definicja CD7 jest używana do diagnozy chłoniaków, limfoblastycznej białaczki limfoblastycznej u dzieci.
• CD8 to białko składające się z dwóch łańcuchów polipeptydowych połączonych mostkami dwusiarczkowymi. Wyrażane jest przez subpopulację limfocytów T cytotoksycznych i supresorowych, które zawierają 20-35% limfocytów krwi obwodowej. Ten antygen ma również limfocyty NK, tymocyty korowe, 30% rdzeniowych tymocytów i subpopulację czerwonych komórek szpiku kostnego. CD8 jest badany pod kątem ilościowej oceny zawartości supresora T (patrz sekcja "Limfocyty T-supresory we krwi" powyżej).

• CD10 to endopeptydaza związana z błoną komórkową. CD10 eksprymuje młode postacie limfocytów B i subpopulację limfocytów korowych. CD10 eksprymuje wszystkie komórki ALL.
• Ekspresja makrofagów CD, C, monocytów, granulocytów, komórek NK i komórek białaczki włochatych w błonie komórkowej.
• CD13 to glikoproteina wyrażana przez komórki mielomonocytowe (komórki progenitorowe, neutrofile, bazofile, eozynofile, monocyty i komórki białaczki szpikowej). Jest nieobecny w limfocytach T, B, erytrocytach i płytkach krwi.
• CD14 to glikoproteina na powierzchni błony komórkowej. Wyrażany jest głównie przez monocyty i makrofagi. CD14 wykrywa się w ponad 95% monocytach krwi obwodowej i szpiku kostnego. Silną ekspresję CD14 obserwuje się w ostrej białaczce mieloblastycznej. W ostrej i przewlekłej białaczce limfoblastycznej ten antygen nie ulega ekspresji.
• CD15 to oligosacharyd. Bierze udział w procesach fagocytozy i chemotaksji. Antygen ten występuje na powierzchni dojrzałych granulocytów i komórek Berezovsky'ego-Sternberga. Ekspresja antygenu CD15 jest wykrywana w chorobie Hodgkina. W przypadku chłoniaków nieziarniczych CD15 nie jest wykrywany w większości przypadków.
• CD16 ulega ekspresji na powierzchni granulocytów, monocytów, makrofagów i komórek NK. Wszystkie limfocyty eksprymujące ten antygen mają zdolność do cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał. CD16 jest określany podczas wpisywania przewlekłych białaczek mielocytarnych w celu scharakteryzowania komórek NK.
• CD19 jest glikoproteiną obecną na wszystkich obwodowych limfocytach B, jak również na wszystkich prekursorach komórek B. Jest nieobecny w komórkach plazmatycznych. Jest to najwcześniejszy marker komórek B, odgrywa ważną rolę w regulacji aktywacji i proliferacji limfocytów B. CD19 ulega ekspresji we wszystkich komórkach nowotworowych ostrej białaczki pochodzenia komórek B, a także jest obecny w niektórych postaciach ostrej białaczki monoblastycznej.
• CD20 jest nieglikozylowanym białkiem. W ontogenezie limfocytów B antygen CD20 pojawia się po CD19 na etapie różnicowania limfocytów przed komórkami B. Nie ma go na błonie plazmatycznej komórek plazmatycznych. Wyrażany jest w ALL, przewlekłej białaczce limfocytowej B, białaczce włochatokomórkowej, chłoniaku Burkitta i bardzo rzadko w ostrej białaczce monoblastycznej.
• CD21 jest glikoproteiną, w znaczącej ilości jest obecna na limfocytach B w narządach limfoidalnych iw niewielkiej ilości na komórkach B krwi obwodowej. CD21 jest receptorem dla wirusa Epstein-Barr.
• CD22 jest białkiem składającym się z dwóch łańcuchów polipeptydowych. Wyrażany jest na błonie większości limfocytów B, w tym komórek progenitorowych (prolifocytów). Antygen nie ulega ekspresji na limfocytach B (komórkach plazmatycznych) po ich aktywacji. Najbardziej wyraźną ekspresję CD22 wykrywa się na komórkach z białaczką włochatokomórkową, słabą - w białaczkach szpikowych i bez ALL komórek T.
• CD23 jest glikoproteiną wyrażoną przez aktywowane limfocyty B krwi obwodowej w znacznie większym stopniu. CD23 pośredniczy w cytotoksyczności zależnej od IgE i fagocytozie przez makrofagi i eozynofile.
• CD25 jest jednołańcuchową glikoproteiną zidentyfikowaną jako receptor IL-2 o niskim powinowactwie. Receptor ten ulega ekspresji na aktywowanych limfocytach T i na niższej gęstości na aktywowanych komórkach B. W krwi obwodowej zdrowych ludzi antygen występuje w ponad 5% komórek limfoidalnych.
• CD29 jest receptorem fibronektyny. Jest szeroko rozpowszechniony w tkankach, ulega ekspresji w leukocytach. Detekcja CD29 na komórkach krwi obwodowej jest używana do typowania subpopulacji komórek T mających fenotyp CD4 + CD29 +, które są nazywane pomocnikiem typu 2 (Th2). Komórki te, poprzez produkcję limfokin, uczestniczą w realizacji humoralnej odpowiedzi immunologicznej.
• CD33 jest glikoproteiną przezbłonową. Występuje na powierzchni komórek szeregu mieloidowego i monocytarnego. Występuje na powierzchni monocytów i, w mniejszym stopniu, w granulocytach krwi obwodowej. Około 30% czerwonych komórek szpiku kostnego eksprymuje CD33, w tym mieloblasty, promielocytów i mielocytów. Antygen nie występuje na błonach pluripotencjalnych komórek macierzystych. CD33 jest używany do charakteryzowania komórek w białaczkach szpikowych. Komórki białaczkowe pochodzenia limfatycznego i erytroidalnego nie eksprymują CD33.
• CD34 to fosfoglikoproteina wyrażana przez hematopoetyczne komórki progenitorowe, w tym monopotne komórki macierzyste. Najbardziej wyraźną ekspresję Ar obserwuje się we wczesnych progenitorach; gdy komórki dojrzewają, ekspresja markera spada. CD34 znajduje się również na komórkach śródbłonka. CD34 jest używany do charakteryzowania komórek w ostrej białaczce szpikowej i limfoblastycznej. W przypadku przewlekłej białaczki limfatycznej i chłoniaków nie wykryto ekspresji antygenu CD34.

• CD41a ulega ekspresji przez płytki krwi i megakariocyty. Przeciwciała monoklonalne do wykrywania CD41a są stosowane do diagnozowania białaczki megakarioblastycznej. W przypadku trombastenii Glązmanna ekspresja tego antygenu jest nieobecna lub znacznie osłabiona.
• CD42b jest glikoproteiną błonową składającą się z dwóch łańcuchów polipeptydowych. Marker znajduje się na powierzchni płytek krwi i megakariocytów. W praktyce klinicznej do diagnozowania trombocytopatii stosuje się wykrywanie CD42b - zespół Bernarda-Souliera.
• CD45RA należy do klasy glikoprotein transbłonowych. Jest to powszechny antygen leukocytów. Wyraża się ją na błonie komórkowej limfocytów B, w mniejszym stopniu limfocytów T i na dojrzałych tymocytach rdzeniastych. Marker nie ulega ekspresji przez granulocyty.
• CD45RO jest izoformą o niskiej masie cząsteczkowej CD45RA, pospolitym leukocytem Ag. Można je znaleźć na limfocytach T (limfocyty T pamięci), subpopulacjach limfocytów B, monocytach i makrofagach. Przeciwciała monoklonalne przeciwko CD45RO oddziałują z większością tymocytów, subpopulacja spoczynkowych limfocytów T CD4 + i CD8 + oraz dojrzałych aktywowanych komórek T. Komórki pochodzenia mielomonocytowego, granulocyty i monocyty również niosą ten antygen. Wykrywany jest w chłoniakach centroblastycznych i immunoblastycznych.
• CD46 - O-glikozylowany dimer. Jest on powszechnie w tkankach i wyrażono T i limfocyty B, monocyty, granulocyty, komórki NK, płytki krwi, komórki śródbłonka, fibroblasty, lecz nie znajduje się na powierzchni erytrocytów. CD46 zapewnia ochronę tkanki przed działaniem dopełniacza.
• CD61 jest antygenem płytkowym. Wyrażany jest na płytkach krwi obwodowej i czerwonym szpiku kostnym, a także na megakariocytach i megakarioblastach. Jego definicja służy jako marker ostrej białaczki megakarioblastycznej. Ekspresja antygenu jest nieobecna lub hamowana u pacjentów z trombastenią Glanzmanna.
• CD95, zwany także Fas lub APO-1, jest transbłonową glikoproteiną, członkiem rodziny receptorów czynnika martwicy nowotworu. Wyrażany jest w znaczących ilościach na limfocytach T krwi obwodowej (CD4 + i CD8 +) oraz, w mniejszym stopniu, na limfocytach B i komórkach NK. Antygen ten jest również eksprymowany na granulocytach, monocytach, komórkach tkankowych i komórkach nowotworowych. Wiązanie CD95 z ligandem Fas (CD95L) indukuje apoptozę w komórkach.
• CD95L lub ligand Fas, białko błonowe należące do rodziny receptorów czynnika martwicy nowotworu. Antygen ten jest wyrażany przez cytotoksyczne limfocyty T, komórki NK i bardzo często przez komórki nowotworowe; główny induktor apoptozy w komórkach.
• HLA-DR jest monomorficzną determinantą cząsteczek klasy II głównego ludzkiego kompleksu zgodności tkankowej (HLA). Marker ulega ekspresji na komórkach Langerhansa, komórkach dendrytycznych narządach limfoidalnych, niektórych typach makrofagów, limfocytach B, aktywowanych komórkach T i komórkach nabłonka grasicy. Test dla tego markera służy do ilościowego oznaczenia aktywowanych limfocytów T o fenotypie CD3 + HLA-DR +.

Używając innej selekcji przeciwciał monoklonalnych do markerów, można stworzyć fenotypowy portret komórek charakterystyczny dla danej postaci białaczki.

Poza tym przy użyciu technik Immunofenotypowanie do diagnozowania i diagnostyce różnicowej chorób rozrostowych układu krwiotwórczego, szczególnie ważne okazało ich zastosowanie w procesie leczenia w celu oceny stanu remisji i pozostałej populacji komórek białaczkowych. Znając fenotypową „Portret” komórek hutniczych w okresie diagnozowania, do tych markerów może znaleźć komórek białaczkowego klon w remisji, oraz ze wzrostu ich liczby - przewidzieć rozwój nawrót długo (do 1-4 miesięcy), aż jej klinicznych i morfologicznych cech.

[1], [2], [3], [4],