Badanie mikrobiologiczne plwociny

Badanie mikrobiologiczne jest najważniejszym ogniwem w diagnostycznym poszukiwaniu i weryfikacji czynnika wywołującego zapalenie płuc. Polega ono nie tylko na wyizolowaniu czynnika wywołującego, ale także na badaniu jego właściwości, w tym wrażliwości na różne leki o działaniu bakteriobójczym i bakteriostatycznym.

W tym celu stosuje się metodę posiewu plwociny na różne podłoża odżywcze. W próbce plwociny dostarczonej do laboratorium wybiera się grudki ropne i starannie przemywa się je na płytce Petriego izotopowym roztworem chlorku sodu, co w pewnym stopniu pozwala na ich uwolnienie od mikroflory górnych dróg oddechowych. Posiew grudek ropnych plwociny przeprowadza się na różne podłoża odżywcze, których skład opisany jest w specjalnych podręcznikach z zakresu mikrobiologii. Podłoża z posiewami inkubuje się w temperaturze 37,5 °C przez 24 godziny. Z wyhodowanych kolonii izoluje się czyste kultury, identyfikuje się je znanymi metodami mikrobiologicznymi i określa ich wrażliwość na antybiotyki.

Aby określić zawartość ilościową mikroorganizmów, plwocina jest homogenizowana, mieszana z bulionem odżywczym, a z mieszaniny sporządzane są kolejne dziesięciokrotne rozcieńczenia, które są zaszczepiane na szalkach Petriego z agarem krwawym. Po 24 godzinach inkubacji w temperaturze 37,5°C wyniki są brane pod uwagę, licząc kolonie tego samego typu pod względem wyglądu i biorąc pod uwagę stopień rozcieńczenia materiału. Z kolonii sporządzane są rozmazy i badane pod mikroskopem.

Interpretacja wyników

Interpretacja wyników badania mikrobiologicznego plwociny jest dość złożona, co tłumaczy się szeregiem czynników. Wspomniano już powyżej o stałym zasiedlaniu treści oskrzelowej mikroflorą górnych dróg oddechowych i jamy ustnej oraz częstej obecności w normalnej treści tchawiczo-oskrzelowej zdrowych ludzi większości najbardziej typowych czynników sprawczych chorób układu oddechowego (pneumokoki, paciorkowce, gronkowce itp.). W związku z tym wyizolowanie w plwocinie podczas badań mikrobiologicznych związku różnych mikroorganizmów, z których większość w tym konkretnym przypadku jest oportunistyczna, niezwykle utrudnia ustalenie czynnika sprawczego choroby. Dlatego do interpretacji wyników badania mikrobiologicznego plwociny konieczne jest uwzględnienie ilościowej przewagi określonego rodzaju bakterii (powyżej 10 ⁶ -10 ⁷ mc/ml), pojawienia się określonych drobnoustrojów w fazie zaostrzenia i ich zaniku w okresie remisji. Bardzo ważne jest uwzględnienie obrazu klinicznego choroby.

Główne i możliwe czynniki wywołujące różne postacie kliniczne zapalenia płuc

Postać kliniczna zapalenia płuc	Główne patogeny	Możliwe patogeny
Krupowy	Pneumokoki	Paciorkowce, Klebsiella
Po grypie	Gronkowce, pneumokoki, klebsiella	Haemophilus influenzae, paciorkowce
Ropień	Gronkowce, bakterioidy, flora mieszana	Pałeczka ropy błękitnej
Dążenie	Bacteroides, paciorkowce beztlenowe	Gronkowce, pneumokoki
Pooperacyjny	Gronkowce	Pneumokoki, Klebsiella
Śródmiąższowy	Mykoplazmy	Patogeny ornitozy, psitakozy
Wtórne zapalenie płuc u pacjentów szpitalnych bez wcześniejszej terapii przeciwbakteryjnej	Gronkowce, pneumokoki, klebsiella, bacteroides	Escherichia coli, serratia itp.
Wtórne zapalenie płuc rozwinęło się na tle terapii przeciwbakteryjnej	Mikroorganizmy fakultatywne patogenne	Pseudomonas, Serratia, Klebsiella, Staphylococcus, Proteus, itp.
U pacjentów z przewlekłym zapaleniem oskrzeli	Pneumokoki, Haemophilus influenzae	Gronkowce, paciorkowce
U pacjentów z chorobą alkoholową	Pneumokoki, Haemophilus influenzae, Klebsiella	E. coli, pierwotniaki
W zespole nabytego niedoboru odporności	Pneumocystis, grzyby	Cytomegalowirusy
U pacjentów, których opieką zajmują się osoby z zewnątrz	Pneumokoki, gronkowce, brodawki hemofilowe	Klebsiella, Escherichia coli

Przy ilościowej ocenie wyników badania skażenia mikrobiologicznego u pacjentów z zapaleniem płuc należy pamiętać o niezwykle wysokiej wrażliwości tego wskaźnika na przepisywanie antybiotyków. Nawet krótkotrwałe leczenie lekami przeciwbakteryjnymi może prowadzić do gwałtownego spadku skażenia mikrobiologicznego, co nie pozwala na odpowiednią ocenę wyników badania plwociny. Dlatego wskazane jest pobranie plwociny przed przepisaniem leczenia antybiotykowego.

Należy również zauważyć, że do hodowli wewnątrzkomórkowych patogenów zapalenia płuc (mykoplazmy, legionella, chlamydia, riketsje) stosuje się specjalne selektywne podłoża odżywcze. Rutynowe badania mikrobiologiczne przy użyciu konwencjonalnych podłoży odżywczych (agar-agar) nigdy nie dają pozytywnych wyników. Dlatego wybór konkretnych metod badań mikrobiologicznych powinien być przeprowadzony przy udziale lekarza prowadzącego, który jest zobowiązany poinformować lekarza laboratoryjnego o swoich podejrzeniach dotyczących możliwej roli wewnątrzkomórkowych patogenów w wystąpieniu zapalenia płuc u tego pacjenta.

Należy dodać, że w rzeczywistej praktyce klinicznej nawet technicznie doskonałe badanie mikrobiologiczne plwociny pozwala na identyfikację patogenu w nie więcej niż 40-60% przypadków. Dlatego też do weryfikacji patogenu można zastosować inne nowoczesne metody badawcze. Zawartość informacyjną badania bakteriologicznego można znacznie zwiększyć, stosując aspirat tchawiczo-oskrzelowy, płyn uzyskany podczas płukania oskrzelowo-pęcherzykowego (BAL), bronchoskopii itp., a nie plwocinę, jako badany materiał biologiczny.

Ponadto do identyfikacji patogenów zapalenia płuc można stosować metodę immunofluorescencji różnych materiałów biologicznych (materiał bronchoskopowy, krew, zawartość opłucnej itp.), metody diagnostyczne PCR oraz badanie poziomu swoistych przeciwciał w surowicy krwi. Niestety, te metody diagnostyczne nie znalazły jeszcze szerokiego zastosowania klinicznego i są obecnie stosowane jedynie w dużych wyspecjalizowanych ośrodkach i laboratoriach.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]