Test ureazy 13c: przygotowanie, wyniki, wynik pozytywny, wynik negatywny

Od czasu odkrycia bakterii Helicobacter pylori powiązanej z przewlekłym zapaleniem błony śluzowej żołądka oraz chorobą wrzodową żołądka i dwunastnicy, opracowano metody diagnostyczne, w tym test ureazowy, który umożliwia wykrycie tych drobnoustrojów u konkretnego pacjenta, potwierdzenie ich udziału w rozwoju chorób przewodu pokarmowego i zalecenie skutecznego leczenia.

Enzym ureazy jako biomarker zakażenia Helicobacter

Bakterie H. pylori chronią się przed kwaśnym środowiskiem w świetle żołądka na dwa sposoby. Po pierwsze, uszkadzając błonę śluzową swoimi wiciami, mikroorganizmy docierają do jej dolnych warstw, aż do komórek nabłonkowych, gdzie pH jest wyższe (tj. kwasowość jest niższa). Po drugie, bakterie neutralizują kwas, syntetyzując duże ilości katalitycznie aktywnego wysokocząsteczkowego metaloenzymu ureazy lub amidohydrolazy mocznika.

Zastosowanie ureazy w diagnostyce Helicobacter jest możliwe dzięki nie tylko aktywności cytoplazmatycznej tego enzymu, ale także zewnętrznej interakcji z komórkami gospodarza.

Pod wpływem ureazy następuje rozkład mocznika żołądkowego na azotek wodoru (amoniak) i dwutlenek węgla (dwutlenek węgla). Reagują one z kwasem solnym w soku żołądkowym i zapewniają strefę neutralnej kwasowości wokół H. pylori, a także wspomagają metabolizm komórek bakteryjnych.

Dlatego ureaza jest najważniejszym czynnikiem kolonizacji H. pylori w błonie śluzowej żołądka człowieka, a wykrycie aktywności ureolitycznej uważa się za biomarker wirulencji tej bakterii, który gastroenterolodzy – wykonując test ureazowy – wykorzystują do diagnozy zakażenia Helicobacter, a także do monitorowania efektów polekowego niszczenia (eradykacji) bakterii.

Diagnostyka H. pylori obejmuje testy inwazyjne i nieinwazyjne – w zależności od tego, czy wymagane jest badanie endoskopowe żołądka (fibrogastroduodenoskopia), czy nie. Testem inwazyjnym jest szybki test ureazowy lub ekspresowy test ureazowy (RUT-test), który wymaga pobrania próbek tkanek (biopsja). Test oddechowy z mocznikiem 13C (13C-UBT) jest najczęstszym testem nieinwazyjnym.

Należy zauważyć, że nieinwazyjną diagnostykę H.pylori można wykonać za pomocą badania krwi na przeciwciała (swoistość na poziomie 75%, czułość - 84%), testu ELISA moczu (o czułości 96% i swoistości 79%) oraz koprogramu na antygeny bakteryjne. Więcej informacji - Zakażenie Helicobacter pylori: przeciwciała przeciwko Helicobacter pylori we krwi

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Wskazania do zabiegu test ureazy

Kolonizacja błony śluzowej żołądka przez H. pylori sama w sobie nie jest chorobą, jest natomiast czynnikiem zwiększającym obciążenie bakteryjne organizmu, co w pewnych warunkach może wywołać rozwój szeregu patologii żołądka i górnego odcinka przewodu pokarmowego.

Wskazania do diagnostyki zakażenia Helicobacter, w szczególności testu ureazowego, wiążą się z zapaleniem żołądka ze zwiększoną kwasowością, zapaleniem odźwiernikowym i zanikowym żołądka, zapaleniem dwunastnicy, wrzodem żołądka i dwunastnicy, chłoniakiem MALT żołądka. Po endoskopowej resekcji wczesnego stadium raka żołądka można wykonać badanie histologiczne w połączeniu z szybkim testem ureazowym - FGDS z testem ureazowym.

Gastroenterolodzy mogą zlecić wykonanie testu ureazowego, jeżeli pacjenci skarżą się na uczucie ciężkości i dyskomfortu w okolicy nadbrzusza, częstą zgagę po jedzeniu, kwaśne lub cuchnące odbijanie, gorycz w ustach, nudności, zaburzenia jelitowe, ból lub skurcze żołądka.

[ 8 ], [ 9 ]

Przygotowanie

Przygotowanie do testu oddechowego z mocznikiem 13C polega na tym, że pacjent zaprzestaje: przyjmowania antybiotyków na 4 tygodnie przed badaniem, a także NLPZ, inhibitorów pompy protonowej (zmniejszających kwasowość żołądka) i leków zobojętniających kwasy żołądkowe lub adsorbentów stosowanych na zgagę - co najmniej na dwa tygodnie przed. Przyjmowanie jakichkolwiek leków należy przerwać na pięć do sześciu dni, a picie alkoholu i palenie - na trzy dni przed badaniem.

Zaleca się również unikanie spożywania roślin strączkowych przez około tydzień przed wykonaniem testu, ponieważ fasola, groch, soczewica, soja i fasola zawierają ureazę (która chroni rośliny przed chorobami i szkodnikami).

Wieczorem poprzedzającym badanie nie zaleca się spożywania późnej, obfitej kolacji, w dniu badania należy dbać o higienę jamy ustnej, a półtorej godziny przed badaniem nie należy nic pić ani używać gumy.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Technika test ureazy

Technika wykonania:

• Najpierw pobierana jest podstawowa próbka oddechowa - wydech jest umieszczany w miękkim plastikowym pojemniku (i hermetycznie zamykany);
• płyn z dodatkiem mocznika 13C przyjmuje się doustnie;
• Po upływie 25–30 minut pobiera się drugą próbkę wydychanego powietrza do innego pojemnika.

Uzyskane w ten sposób próbki analizuje się na spektrometrze masowym z rozdzieleniem izotopów w drugiej próbce i określeniem ich stężenia. Różnicę między wartościami w drugiej i pierwszej próbce wyraża się jako delta (δ) w porównaniu do poziomu bazowego. Wartości normalne, tj. ujemne wartości znakowanego atomu 13C u pacjentów niezakażonych wahają się od 0,15-0,46%, a wartości dodatnie w obecności zakażenia wynoszą 1,2-9,5% przy szybkości hydrolizy mocznika większej niż 12-14 μg/min.

Mówiąc prościej: wykrycie dwutlenku węgla znakowanego 13C w wydychanym powietrzu wskazuje, że mocznik został zhydrolizowany przez enzym ureazę H. pylori, co w istocie potwierdza fakt jego obecności w żołądku.

Test oddechowy na obecność bakterii H. pylori

Test 13C-UBT lub test oddechowy z mocznikiem 13C w celu wykrycia Helicobacter pylori jest jedną z najważniejszych nieinwazyjnych metod wykrywania tego zakażenia: przy 100% czułości i 98% swoistości ryzyko wyników fałszywie dodatnich i fałszywie ujemnych w porównaniu z badaniami histologicznymi i badaniami przeciwciał we krwi jest o 2,3% niższe.

Analiza opiera się na hydrolizie doustnie podanego płynnego mocznika znakowanego atomem węgla (stabilny izotop nieradioaktywny) 13C (50–75 mg 13C-mocznika rozcieńczonego w 100 ml płynu) przez ureazę H. pylori.

Mocznik znakowany wskaźnikiem izotopowym ulega hydrolizie w żołądku z uwolnieniem amoniaku i dwutlenku węgla zawierającego znakowane atomy, który dyfunduje do krwi i jest wydalany z płuc podczas oddychania. Znakowany dwutlenek węgla jest rejestrowany przez urządzenie analityczne - spektrometr masowy, którego działanie opiera się na niedyspersyjnej selektywnej spektroskopii izotopowej lub analizator spektroskopowy w podczerwieni.

Szybki test ureazowy

Szybki test ureazowy (RUT) wykonuje się podczas endoskopowego badania żołądka i dwunastnicy - przy użyciu nowoczesnych endofibroskopów - i jednoczesnego pobierania próbek biopsyjnych. Biomateriał ma być pobrany z części antralnej żołądka. Tak więc fibrogastroduodenoskopia lub FGDS z testem ureazowym jest inwazyjną metodą diagnostyczną.

Uzyskany materiał biopsyjny zanurza się całkowicie w przygotowanym, standaryzowanym podłożu zawierającym żel agarowy, mocznik, wskaźnik kwasowo-zasadowy fenolosulfoftaleinę i środek bakteriostatyczny (dodawany w celu zapobiegania rozwojowi zanieczyszczających mikroorganizmów i uzyskiwaniu fałszywie dodatnich wyników).

Jeśli w próbce tkanki żołądka obecne są bakterie H. pylori, ureaza, którą produkują, hydrolizuje mocznik i podnosi pH, co jest wyraźnie widoczne, gdy wskaźnik zmienia kolor z żółtego na pomarańczowy (przy pH 6,8) i fioletowy (przy pH> 8). 75% pozytywnych testów zmienia kolor w ciągu 120–180 minut, a im szybciej wskaźnik zmienia kolor, tym większa jest liczba bakterii. Jednak testy, które wydają się negatywne, są przechowywane przez 24 godziny.

Szybki test ureazowy pozytywny, co to oznacza? Pozytywny test RUT – wskaźnik zmienia kolor na czerwony – oznacza, że próbka biopsji umieszczona w podłożu agarowym zawiera co najmniej 105 bakterii H. pylori, chociaż ich stężenie jest zwykle wyższe.

Czułość poszczególnych modyfikacji testu waha się w granicach 90-98%, a swoistość – 97-99%.

Jak zauważają gastroenterolodzy, jeśli wniosek pacjenta wskazuje na ostro dodatni test ureazowy (trzy krzyżyki), oznacza to: pH> 8, a wskaźnik zmienił kolor w czasie krótszym niż 60 minut od momentu zanurzenia biopsji, co wskazuje na dużą liczbę H. pylori i wysoki poziom ekspresji ureazy. Przybliżoną liczbę bakterii można policzyć podczas badania histologicznego biopsji pod mikroskopem, a jeśli przekracza ona 40-50 w widocznym obszarze, poziom zakażenia uważa się za wysoki.

Test oddechowy z mocznikiem 13C rzadko daje fałszywie dodatnie wyniki, a u pacjentów z podejrzeniem choroby wrzodowej żołądka lub dwunastnicy wystarczy jeden dodatni wynik testu, aby potwierdzić rozpoznanie, natomiast wynik ujemny należy potwierdzić testem oddechowym z mocznikiem.