Corynebacteriae

Błonica jest ostrą chorobą zakaźną głównie z dzieciństwa, która objawia się głębokim zatruciem organizmu toksyną błoniczą i charakterystycznym włóknikowym stanem zapalnym w miejscu patogenu. Nazwa choroby pochodzi od greckiego słowa diphthera - skóra, film, ponieważ w miejscu hodowli patogenu tworzą się gęste, szaro-białe postacie filmowe.

Czynnik wywołujący błonicę, Corynebacterium diphtheriae, został po raz pierwszy odkryty w 1883 r. Przez E. Klebsa w plasterkach z filmu, uzyskanego w czystej kulturze w 1884 r. Przez F. Lefflera. W 1888 r. E. Ru i A. Iersen odkryli jego zdolność do wytwarzania egzotoksyny, która odgrywa główną rolę w etiologii i patogenezie błonicy. Otrzymanie w 1892 r. Antytoksycznej surowicy przez E. Beringa i jej zastosowanie od 1894 r. W leczeniu błonicy umożliwiło znaczne zmniejszenie śmiertelności. Udany atak na tę chorobę rozpoczął się po 1923 roku w związku z opracowaniem metody G. Rayona otrzymywania toksoidu błoniczego.

Czynnik sprawczy błonicy należy do rodzaju Corynebacterium (klasa Actinobacteria). Morfologicznie charakteryzuje się tym, że komórki na końcach mają kształt kostek (greckie sosny - maczuga), tworzą rozgałęzienia, zwłaszcza w starych kulturach, i zawierają inkluzje ziarniste.

Rodzaj Corynebacterium obejmuje dużą liczbę gatunków, które są podzielone na trzy grupy.

• Corynebacteria są pasożytami ludzi i zwierząt oraz patogennymi dla nich.
• Corynebacteria, patogenne dla roślin.
• Niepatogenne corynebacteria. Wiele gatunków Corynebacterium to normalni mieszkańcy skóry, błon śluzowych, nosogardzieli, oczu, dróg oddechowych, cewki moczowej i narządów płciowych.

[1], [2], [3], [4], [5]

Morfologia corynebakterii

C. Diphtheriae - proste lub lekko zakrzywione sztyfty o długości 1,0-8,0 μm i średnicy 0,3-0,8 μm, nie tworzą zarodników i kapsułek. Bardzo często mają obrzęki na jednym lub obu końcach, często zawierają granulki metachromatyczne - ziarno spiralne (polimetafosforany), które przy niebieskawym zabarwieniu z błękitu metylenowego uzyskują niebiesko-fioletowy kolor. Do ich wykrywania proponowana jest specjalna metoda barwienia według Neisser. W tym przypadku patyki są zabarwione na słomie, a ziarna spiralne są ciemnobrązowe i zwykle znajdują się na biegunach. Corynebacterium diphtheriae jest dobrze zabarwiony barwnikami anilinowymi, Gram-dodatnimi, ale w starych hodowlach jest często przebarwiony i ma negatywne zabarwienie Gram. Charakteryzuje się wyraźnym polimorfizmem, szczególnie w starych kulturach i pod wpływem antybiotyków. Zawartość G + C w DNA wynosi około 60% molowych.

Właściwości biochemiczne corynebacteria

Błonica błonicza jest tlenową lub fakultatywną beztlenową, optymalną temperaturą dla wzrostu 35-37 ° C (granice wzrostu 15-40 ° C), optymalną wartością pH 7,6-7,8. Do pożywki nie jest bardzo wymagająca, ale lepiej rośnie na podłożach zawierających surowicę lub krew. Selektywne dla bakterii błoniczych są zwinięte podłoże w surowicy Py lub Leffler, wzrost na nich pojawia się 8-12 godzin w postaci wypukłej, wielkości główki kolonii o szarawo-białej lub żółtobrązowej barwie. Ich powierzchnia jest gładka lub lekko ziarnista, na obrzeżach kolonii nieco bardziej przezroczysta niż w środku. Kolonie nie łączą się, czego skutkiem jest kultura przypominająca skórę shagreen. Na bulionie wzrost objawia się jednolitym zmętnieniem lub bulion pozostaje przezroczysty, a na jego powierzchni powstaje delikatny film, który stopniowo pogrubia, kruszy się, a płatki spływają na dno.

Cechą bakterii błonicy jest ich dobry wzrost na krwi i podłożach w surowicy zawierających stężenia telluranu potasu, które hamują wzrost innych gatunków bakterii. Wynika to z faktu, że C. Diphtheriae rekonstruuje telluryt potasu na tellur metaliczny, który osadzony w komórkach drobnoustrojów nadaje kolonie charakterystyczny kolor ciemnoszary lub czarny. Zastosowanie takich mediów zwiększa odsetek zasianych bakterii błoniczych.

Corynebacterium diphtheriae fermentuje glukozę, maltozę, galaktozę, tworząc kwas bez gazu, ale nie fermentuje (zazwyczaj) sacharozy mają tsistinazu ureazy nie ma i nie stanowią indol. Na tej podstawie, są one różne od tych bakterii Corynebacterium (diphtheroids), którzy są bardziej prawdopodobne na błonę śluzową oka (Corynebacterium xerosus) i nosogardzieli (Corynebacterium pseiidodiphtheriticum) i inne diphtheroids.

W naturze istnieją trzy główne warianty (biotyp) błonicy pałeczkowej: gravis, intermedyny i mitis. Różnią się one właściwościami morfologicznymi, kulturowymi, biochemicznymi i innymi.

Podział bakterii błoniczych na biotypy dokonano biorąc pod uwagę formy błonicy u pacjentów, którym przydzielono je z największą częstotliwością. Typ gravisu jest częściej izolowany od pacjentów z ciężką błonicą i powoduje zgnilizny grupowe. Wpisz mitis powoduje lżejsze i sporadyczne przypadki chorób, a pośrednik typu zajmuje pośrednią między nimi pozycję. Corynebacterium belfanti, uprzednio przypisane biotypowemu zapaleniu mitis, izoluje się w osobnym, czwartym biotypie. Jego główną różnicą w stosunku do biotypów gravis i mitis jest zdolność do przywracania azotanów do azotynów. Szczepy Corynebacterium belfanti mają wyraźne właściwości adhezyjne, a wśród nich znajdują się zarówno warianty toksyczne, jak i nietoksyczne.

[6], [7], [8], [9], [10]

Struktura antygenowa bakterii z rodzaju Corynebacteria

Corynebacterium jest bardzo niejednorodna i ma mozaikę. Czynniki sprawcze błonicy wszystkich trzech typów ujawniły kilkadziesiąt antygenów somatycznych, zgodnie z którymi są one podzielone na serotypy. W Rosji przyjęto klasyfikację serologiczną, według której rozróżnia się 11 serotypów bakterii błoniczych, 7 z nich to pierwotne (1-7) i 4 dodatkowe, rzadko występujące serotypy (8-11). Sześć serotypów (1, 2, 3, 4, 5, 7) ma typ gravis, a pięć (6,8,9,10,11) jest typu mitis. Wadą metody serotypowania jest to, że wiele szczepów, zwłaszcza nietoksycznych, wykazuje spontaniczną aglutynację lub zdolność do polibutynacji.

[11]

Cagotipirovane Corynebacterium diphtheriae

Zaproponowano różne schematy typowania faga do różnicowania bakterii błoniczych. Zgodnie ze schematem MD Kryłowa, za pomocą zestawu 9 fagów (A, B, C, D, F, G, H, I, K), większość toksycznych i nietoksycznych szczepów typu gravis można pisać na maszynie. Z uwagi na wrażliwość na wspomnianej faga, jak również kultury, właściwości antygenowych i zdolność do syntezy białek (koritsiny bakteriobójcze) MD Kryłowa przydzieloną oddzielne grupy 3 Rodzaj maczugowce gravis (I-III). W każdym z nich znajdują się podgrupy toksycznych i nietoksycznych analogów czynników błoniczych.

Oporność bakterii z rodzaju Corynebacteria

Corynebacterium diphtheriae wykazuje dużą odporność na niskie temperatury, ale szybko ginie w wysokiej temperaturze: w temperaturze 60 ° C - przez 15-20 minut, w temperaturze wrzenia - po 2-3 minutach. Wszystkie środki dezynfekujące (lizol, fenol, chloramina itp.) W powszechnie stosowanym stężeniu niszczą go w ciągu 5-10 minut. Jednak czynnik wywołujący błonicę dobrze toleruje suszenie i może pozostać żywy przez długi czas w wysuszonym śluzie, ślinie, w cząstkach pyłu. W drobno rozproszonym aerozolu bakterie błonicze pozostają żywe przez 24-48 godzin.

Czynniki patogenetyczne bakterii z rodzaju Corynebacteria

Patogenność Corynebacterium diphtheriae zależy od obecności wielu czynników.

Czynniki adhezji, kolonizacji i inwazji

Struktury odpowiedzialne za adhezję nie zostały zidentyfikowane, ale bez nich błonica błonicza nie mogłaby skolonizować komórek. Ich rolę spełniają niektóre składniki ściany komórkowej patogenu. Własności inwazyjne czynnika sprawczego są związane z hialuronidazą, neuraminidazą i proteazą.

Toksyczny glikolipid zawarty w ścianie komórkowej patogenu. To oznacza 6,6'-diestru trehalozy zawierającego kwas korinemikolovuyu (S32N6403) i kwas korinemikolinovuyu (Sz2N62Oz) w równomolowym stosunku (6,6'-dikorinemikolat trehaloza). Glikolipid ma niszczący wpływ na komórki tkanki w miejscu rozprzestrzeniania się patogenu.

Exotoksyna, która determinuje patogenność patogenu i naturę patogenezy choroby. Nieoksynogenne warianty C. Diphtheriae nie powodują błonicy.

Egzotoksynę jest syntetyzowana jako nieaktywny prekursor - pojedynczy łańcuch polipeptydowy o M.W. 61 kDa. Jego aktywacja prowadzi własne proteazę bakteryjną, która przecina się z dwóch polipeptydu związanego wiązaniami dwusiarczkowymi pomiędzy peptydu A (masa cząsteczkowa 21 kDa) i B (masa cząsteczkowa 39 kDa). Peptyd akceptorowy pełni funkcję - rozpoznaje receptor wiąże się z nim i tworzy intramembranous kanał, przez który wchodzi do komórki i peptyd A sprzedaje aktywności biologiczne toksyny. Peptyd jest enzymem ADP riboziltransferazu difosforanu adenozyny które zapewnia przenoszenie rybozy z NAD na jednej reszty aminokwasu (histydyna) czynnika elongacji białka EF-2. W wyniku modyfikacji EF-2 traci swoją aktywność, co prowadzi do hamowania syntezy białka na rybosomach etapie translokacji. Toksyna jest syntetyzowana wyłącznie taką C. Diphtheriae, które znajdują się w ich geny chromosomalne umiarkowane konwersji profaga. Operon kodujący syntezę toksynę monocistronowe, składa się z 1,9 tys par zasad i zawiera promotor toxP i 3, strony :. ToxS toxA i toxB. Działka toxS koduje 25 reszt aminokwasowych peptydu sygnałowego (to uzyskuje się wydajność toksyny przez membrany do przestrzeni peryplazmatycznej komórki bakteryjne), toxA - 193 reszt aminokwasowych peptydu A i toxB - 342 reszt aminokwasowych w toksyny peptydu. Utrata profagu komórki lub mutacji w tox-operon zrobić malotoksigennoy komórek. Wręcz przeciwnie, lysogenization nontoxigenic C. Diphtheriae fagi konwersji zamienia je w toxigenic bakterii. Potwierdzają to jednoznacznie: toksykogenność bakterii błonicy zależy od ich lysogenization konwertuje toksykologiczne-korinefagami. Korinefagi zintegrowany do chromosomu maczugowca stosując specyficzne w mechanizm rekombinacji i błonicy szczepy bakteryjne mogą zawierać w swoim chromosomie w 2 miejscach (rekombinacji attB) i korinefagi zintegrowane w każdym z nich z tej samej częstotliwości.

Genetyczna analiza serii bakterii błonicy nontoxigenic szczepów przeprowadzono przy użyciu znakowanych sond DNA niosące fragmenty tox-operonu korinefaga wykazały, że ich chromosomy sekwencje DNA homologiczne Tox-operon korinefaga ale kodują polipeptydy albo nieaktywne lub znajduje się w " cichy "stan, tj. Nieaktywny. W związku z tym jest bardzo ważne pytanie, czy jest epidemiologicznym nontoxigenic bakterie błonicy przekształcić toxigenic in vivo (w organizmie), tak jak ma to miejsce w warunkach in vitro? Możliwość takiej konwersji hodowli Corynebacteria toxigenic nontoxigenic się za pomocą przemiany faga przedstawiono w badaniach na świnkach morskich, zarodków kurzych i białych myszy. Jednakże, czy ma to miejsce podczas naturalnego procesu epidemicznego (a jeśli tak, jak często), nie było jeszcze możliwe jego ustalenie.

Ze względu na fakt, że toksyna błonicy w organizmie pacjentów jest selektywne i specyficzne działanie w niektórych systemach (głównie wpływa sympatho nadnerczowej systemu, serce, naczynia krwionośne i nerwy obwodowe), to oczywiście, że nie tylko hamuje biosyntezę białek w komórkach, ale także powoduje inne zaburzenia ich metabolizmu.

Aby wykryć toksyczność bakterii błoniczych, można zastosować następujące metody:

• Testy biologiczne na zwierzętach. Śródskórna infekcja świnek morskich filtrem kultury bulionowej bakterii błoniczych powoduje ich martwicę w miejscu podania. Jedna minimalna śmiertelna dawka toksyny (20-30 ng) zabija świnkę morską o wadze 250 gi wstrzyknięciu podskórnym w 4-5 dniu. Najbardziej charakterystycznym przejawem działania toksyny jest pokonanie nadnerczy, są one powiększone i ostro przekrwione.
• Infekcja zarodków kurcząt. Toksyna błonicy powoduje ich śmierć.
• Infekcja kultur komórkowych. Toksyna błonicza wywołuje wyraźny efekt cytopatyczny.
• Metoda immunoenzymatycznego testu immunoenzymatycznego w fazie stałej z użyciem antytoksyn znakowanych peroksydazą.
• Zastosowanie sondy DNA do bezpośredniego wykrywania operonu toksycznego w chromosomie bakterii błoniczych.

Jednak najprostszym i najczęstszym sposobem określenia toksyczności bakterii błoniczych jest serologiczny sposób wytrącania w żelu. Istota tego jest następująca. Taśma sterylnej bibuły o wymiarach 1,5 x 8 cm zwilża antytoksyczny błonicy surowicy zawierającego 500 AE 1 ml i naniesiono na powierzchnię pożywki w szalce Petriego. Kubek suszy się w termostacie przez 15-20 minut. Badane kultury inokulowano płytkami po obu stronach papieru. Kilka szczepów wysiewa się na jednej filiżance, z których jedna, znana jako toksyczna, służy jako kontrola. Kubki z roślin inkubowano w temperaturze 37 ° C, a wyniki pozwalają na 24-48 godzin. Antytoksyny żel związku wzajemna i toksyny w miejscu ich wzajemnego oddziaływania tworzy jasną linię precypitacyjny który łączy się z precypitynami linii sterowania toxigenic szczepu. Paski nieswoistej atmosferyczne (są one utworzone, jeżeli antytoksyny surowicy dodatkowo obecne niewielkie ilości innych przeciwciał przeciw drobnoustrojom) pojawiają się później, jest łagodna i nie łączą się z pasem szczepu kontrolnego wytrącanie.

Odporność poinfekcyjna

Silne, trwałe, praktycznie przez całe życie, powtarzające się przypadki choroby obserwuje się rzadko - u 5-7% pacjentów, którzy doszli do siebie. Odporność jest głównie antytoksyczna, przeciwciała antybakteryjne są mniej ważne.

Aby ocenić poziom odporności na anty-ciążę, test Shika był wcześniej szeroko stosowany. W tym celu 1/4 cm toksyny dla świnki morskiej wstrzyknięto śródskórnie dzieciom w objętości 0,2 ml. Jeśli nie antytoksyczny odporność 24-48 godzin w miejscu wstrzyknięcia pojawia zaczerwienienie i obrzęk więcej niż 1 cm. Taka reakcja dodatnia Schick wskazuje albo całkowity brak przeciw toksynie lub że jego zawartość jest mniejsza niż 0,001 AU / ml krwi. Negatywną reakcję Kurczęcia obserwuje się, gdy zawartość antytoksyny we krwi jest wyższa niż 0,03 AE / ml. Jeżeli zawartość antytoksyny wynosi poniżej 0,03 AE / ml, ale powyżej 0,001 AE / ml, reakcja Shicka może być dodatnia lub, czasami, ujemna. Ponadto sama toksyna ma wyraźną właściwość alergiczną. W związku z tym, w celu określenia poziomu antidiphtheria odporności (ilościowo) Zawartość antytoksyny lepsze wykorzystanie TPHA diagnosticum uczulonych erytrocytów z anatoksyną błoniczą.

Epidemiologia błonicy

Jedynym źródłem infekcji jest osoba - chory, rekonwalescent lub zdrowy nosiciel. Zakażenie następuje poprzez powietrzu kropelki, powietrza pył, a także za pomocą różnych przedmiotów, które były używane w pacjentów lub bakterii zdrowych nosicieli: naczynia, książki, pościel, zabawki, itp przypadku zakażenia żywności (mleko, śmietana, itp .... Itp.), możliwe jest zakażenie drogą pokarmową. Największe wydalanie patogenu występuje w ostrej postaci choroby. Jednak najbardziej istotne epidemiologicznie są osoby z wymazanymi, nietypowymi postaciami choroby, ponieważ często nie są hospitalizowane i nie są od razu widoczne. Pacjent błonicy jest zakaźny przez cały okres choroby i część okresu zdrowienia. Średni okres transportu bakterii u rekonwalescentów waha się od 2 do 7 tygodni, ale może trwać do 3 miesięcy.

Szczególną rolę w epidemiologii błonicy odgrywają zdrowe nośniki bakteryjne. W warunkach sporadycznej chorobowości są głównymi dystrybutorami błonicy, przyczyniając się do zachowania patogenu w przyrodzie. Średni czas transportu szczepów toksynowych jest nieco mniejszy (około 2 miesiące) niż szczepy nietoksyczne (około 2-3 miesięcy).

Przyczyna powstawania zdrowego nośnika toksogennych i nietoksycznych bakterii błoniczych nie została w pełni ujawniona, ponieważ nawet wysoki poziom odporności na antytoksję nie zawsze zapewnia całkowite uwolnienie organizmu z patogenu. Być może poziom odporności przeciwbakteryjnej ma pewne znaczenie. Przewóz toksogennych szczepów bakterii błoniczych ma podstawowe znaczenie epidemiologiczne.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19],

Objawy błonicy

Ludzie w każdym wieku są podatni na błonicę. Czynnik sprawczy może przeniknąć ludzki organizm przez błony śluzowe różnych narządów lub uszkodzoną skórę. W zależności od procesu lokalizacyjnego wyróżniają błonicy gardła, nosa, gardła, uszu, oczu, skóry i narządów płciowych. Możliwe formy mieszane, na przykład błonica gardła i skóry itp. Okres inkubacji - 2-10 dni. Jeżeli istotne klinicznie forma błonicy w miejscu lokalizacji patogenu opracowuje charakterystykę włóknikowe zapalenie błony śluzowej. Toksyna wytwarzana przez patogen najpierw wpływa na komórki nabłonka, a następnie na pobliskie naczynia krwionośne, zwiększając ich przepuszczalność. Odciek wysięk zawiera fibrynogen, koagulacji, co powoduje tworzenie się na powierzchni błony śluzowej szaro-białej ataków filmy, które szczelnie wlutowane tkanki przedmiotu i oderwanie od powodować krwawienie. Konsekwencją porażki naczyń krwionośnych może być rozwój miejscowego obrzęku. Szczególnie niebezpieczne jest błonica gardła, ponieważ może to spowodować błonicy zad powodu obrzęku błony śluzowej krtani i strun głosowych, które wcześniej umiera z uduszenia 50-60% chorych z dziećmi błonicy. Toksyna błonicza, wchodząca do krwi, powoduje ogólne głębokie zatrucie. Wpływa głównie na układ sercowo-naczyniowy, układ współczulno-nadnerczowy i nerwy obwodowe. Tak więc objawy błonicy są utworzone z kombinacji miejscowych objawów, w zależności od położenia bramy wjazdowej i ogólne objawy spowodowane zatruciem toksyny i przejawiają się w postaci Adynamia, senność, bladość skóry, obniżanie ciśnienia krwi, zapalenie mięśnia sercowego, porażenia i innych zaburzeń nerwów obwodowych. Błonica u zaszczepionych dzieci, jeśli występuje, występuje z reguły w łagodnej postaci i bez powikłań. Śmiertelność w okresie przed zastosowaniem seroterapii i antybiotyków wynosiła 50-60%, teraz - 3-6%.

Diagnostyka laboratoryjna błonicy

Jedyna metoda diagnostyki mikrobiologicznej błonicy jest bakteriologiczna, z obowiązkowym testowaniem wyizolowanej kultury bakterii z rodzaju Corynebacteria dla toksyczności. Badania bakteriologiczne na temat błonicy prowadzone są w trzech przypadkach:

• do diagnozy błonicy u dzieci i dorosłych z ostrymi procesami zapalnymi w obrębie gardła, nosa, nosogardzieli;
• w sprawie wskazań epidemiologicznych osób, które miały styczność ze źródłem przyczyny błonicy;
• osoby nowo przyjęte do domów dziecka, żłobków, szkół z internatem i innych specjalnych instytucji dla dzieci i dorosłych, w celu zidentyfikowania wśród nich możliwych nośników bakterii pałeczki błoniczej.

Materiał do badań to śluz z gardła i nosa, film z migdałków lub innych błon śluzowych, które są bramą wejściową patogenu. Uprawy wytwarzać telluritovye w surowicy lub krwi, a medium jednocześnie surowicy pożywka rozkodowany Roux (złożone surowicy końskiej) lub Leffler (3 porcje surowicy bydlęcej i 1 część brzeczki cukru), w którym maczugowce wzrost już pojawia się po 8-12 godzin. Otrzymana kultura zidentyfikowano zestaw właściwości morfologicznych, kulturowych i biochemicznych, jeśli to możliwe, wykorzystywać metody typowania szarego i fagowego. We wszystkich przypadkach konieczne jest sprawdzenie toksyczności za pomocą jednej z powyższych metod. Morfologiczne cechy Corynebacterium lepszego badania z zastosowaniem trzech metod przygotowania rozmazu: barwienie Gram Neissera i błękit metylenowy (lub błękit toluidynowy).

Leczenie błonicy

Specyficznym leczeniem błonicy jest stosowanie antytoksynowej surowicy antytoksycznej zawierającej co najmniej 2000 IU na ml. Surowicę podaje się domięśniowo w dawkach od 10 000 do 400 000 IU, w zależności od stopnia nasilenia przebiegu choroby. Skuteczną metodą leczenia jest stosowanie antybiotyków (penicylin, tetracyklin, erytromycyny itp.) Oraz preparatów sulfanilamidowych. Aby stymulować rozwój własnych antytoksyn, można stosować anatoksyny. Do uwolnienia transportu bakteryjnego należy stosować te antybiotyki, na które ten szczep bakterii Corynebacterium jest bardzo wrażliwy.

Specjalna profilaktyka błonicy

Główną metodą walki przeciwko błonicy jest masa rutynowe szczepienie populacji. W tym celu, różne przykłady wykonania stosują szczepionek, w tym kombinacji, tj. E. Skierowana na jednoczesne tworzenie odporności przeciw szeregu patogenom. Najczęściej w Rosji otrzymała szczepionkę DTP. Jest adsorbowane na wodorotlenku glinu bakterii krztuśca zawiesinę zabite formaliną lub tiomersal 20000000000 (1 ml) i zawiera toksoid błoniczy flokulującego dawki 30 jednostek 10 jednostek i tężcową wiązania 1 ml tężca. Zaszczepionych dzieci od 3 miesiąca życia, a następnie wydać szczepienie przypominające: najpierw 1,5-2 lata później, w wieku 9 i 16 lat, a następnie co 10 lat.

Dzięki masowym szczepieniom zapoczątkowanym w ZSRR w 1959 r. Częstość występowania błonicy w kraju do 1966 r. W porównaniu z 1958 r. Została zmniejszona o 45 razy, a jej stawka w 1969 r. Wynosiła 0,7 na 100 000 ludności. Następnie w latach 80-tych. XX wiek. Zmniejszenie liczby szczepień spowodowało poważne konsekwencje. W latach 1993-1996. Rosja była dotknięta epidemią błonicy. Dorośli byli chorzy, głównie nie zaszczepieni, i dzieci. W 1994 roku zarejestrowano prawie 40 tysięcy pacjentów. W związku z tym wznowiono masowe szczepienia. W tym okresie zaszczepiono 132 miliony osób, w tym 92 miliony dorosłych. W latach 2000-2001 zasięg dzieci szczepionych w wyznaczonym okresie wyniósł 96%, a szczepionka przypominająca - 94%. Dzięki temu częstość występowania błonicy spadła w 2001 r. O 15 razy w porównaniu z rokiem 1996. Jednak, aby zmniejszyć częstość występowania do pojedynczych przypadków, w pierwszym roku życia konieczne jest objęcie co najmniej 97-98% dzieci szczepieniem, aw kolejnych latach zapewnić masywną dawkę przypominającą. Osiągnięcie całkowitej eliminacji błonicy w nadchodzących latach jest mało prawdopodobne ze względu na powszechny nośnik toksycznych i nietoksycznych bakterii błoniczych. Zajmie to trochę czasu, aby rozwiązać ten problem.