^

Zdrowie

A
A
A

Diagnoza opryszczki

 
Alexey Kryvenko , Redaktor medyczny
Ostatnia recenzja: 07.07.2025
 
Fact-checked
х

Cała zawartość iLive jest sprawdzana medycznie lub sprawdzana pod względem faktycznym, aby zapewnić jak największą dokładność faktyczną.

Mamy ścisłe wytyczne dotyczące pozyskiwania i tylko linki do renomowanych serwisów medialnych, akademickich instytucji badawczych i, o ile to możliwe, recenzowanych badań medycznych. Zauważ, że liczby w nawiasach ([1], [2] itd.) Są linkami do tych badań, które można kliknąć.

Jeśli uważasz, że któraś z naszych treści jest niedokładna, nieaktualna lub w inny sposób wątpliwa, wybierz ją i naciśnij Ctrl + Enter.

Diagnostyka opryszczki opiera się na klasycznej izolacji wirusa na czułych hodowlach komórkowych, metodach immunofluorescencyjnych i serologicznych, badaniu kolposkopowym oraz zastosowaniu nowoczesnych metod biologii molekularnej (PCR, hybrydyzacja punktowa), co pozwala na rozpoznanie całej grupy wirusów opryszczki, w tym typów HHV-6 i HHV-7.

Laboratoryjne metody diagnostyczne zakażenia wirusem opryszczki

Główne metody mające na celu izolację wirusa HSV lub wykrywanie cząstek wirusa i/lub jego składników

Metody pomocnicze mające na celu wykrywanie przeciwciał przeciwko wirusowi HSV w płynach biologicznych organizmu człowieka

  1. Izolacja wirusa HSV w wrażliwych hodowlach komórkowych i zwierzęcych
  2. Mikroskopia elektronowa bezpośrednia i immunoelektronowa
  3. Warianty bezpośrednie i pośrednie IPA
  4. IFA
  5. Metody biologii molekularnej
  6. Reakcja aglutynacji lateksu
  1. Reakcja neutralizacji
  2. RSC
  3. Oznaczanie przeciwciał przeciwko białkom niestrukturalnym wirusa HSV-1,2

Wykazano, że u 76% chorych opryszczka narządów płciowych (GH) jest wywołana przez HSV-2, a u 24% - przez typ HSV-1. Ponadto GH jako monoinfekcja występowała tylko u 22% chorych, w 78% przypadków wykryto powiązania mikrobiologiczne. U 46% osób wykryto parazytocenozę wywołaną przez dwa patogeny, w tym chlamydie wykryto w 40% przypadków. Gardnerella, Trichomonas i gonokoki wykrywano rzadziej w rozmazach.

U 27% pacjentów parazytocenozę stanowiły trzy patogeny, u 5,2% cztery patogeny. Ponadto najczęściej stwierdzano połączenie chlamydii z gardnerellą i grzybami Candida. Dane te uzasadniają konieczność dokładnego badania bakteriologicznego pacjentów z GH w celu identyfikacji połączeń czynników chorobotwórczych, a także dogłębnego zbadania patogenezy mieszanych zakażeń układu moczowo-płciowego, co pozwoli na zróżnicowaną kompleksową terapię zakażenia wirusem opryszczki.

Materiały badane pod kątem izolacji wirusa HSV w zależności od lokalizacji zmian opryszczkowych

Lokalizacja
zmian


Zawartość pęcherzyków

Skrobanie komórek

Płyn mózgowo-rdzeniowy

Aspirat oskrzelowy

Biopsja

Krew

1

2

3

4

Skóra

+

+

Oczy

+

+

Genitalia

+

+

Odbyt

+

+

+

Usta

+

+

+

Ośrodkowy układ nerwowy

+

+

+

+

Płuca

+

+

+

Wątroba

+

+

Wrodzona
opryszczka

+

+

+

+

+

Metody diagnostyki laboratoryjnej zakażenia cytomegalowirusem

Metody

Czas potrzebny do uzyskania wyników

Notatki

WIRUSOLOGICZNE

Mikroskopia elektronowa

3 godziny

Niezbyt dostępny

Izolacja wirusa w hodowli komórkowej (VCI)

4-20 dni

Standardowy,
Powolny

Barwienie immunofluorescencyjne wczesnego AG przy użyciu przeciwciał monoklonalnych

6 godzin

Mniej
szczegółowe

CYTOLOGICZNE

2-3 godziny

Mniej
szczegółowe

SEROLOGICZNE

RSC

2 dni

Standard

RGA

1 dzień

Pracochłonny

RAFA

6 godzin

Proste,
konkretne

NRIF

6 godzin

Trudny

ODCIĄGAĆ

6 godzin

Trudny

ELISA (IgM, DO)

6 godzin

Szybko, prosto

Immunoblotting

6 godzin

Drogi

BIOLOGIA MOLEKULARNA

MG

5-7 dni

Drogie,
pracochłonne

PCR

3 godziny

Drogi

Metody diagnostyki wirusa półpaśca


Metody diagnostyczne


Techniki laboratoryjne

POŚREDNI

Wybór

Hodowla tkankowa, zarodki kurcząt, zwierzęta laboratoryjne, współhodowla z komórkami permisywnymi lub wirusami pomocniczymi

Identyfikacja izolatów

Reakcja neutralizacji, RSC, IF, PIEF, reakcja wytrącania izolatów, aglutynacja, IF

BEZPOŚREDNI

Cytologia

Rozmazy: immunofluorescencja kolorowa

Histologia

Patomorfologia komórki

Struktura

Mikroskopia embrionalna, mikroskopia immunoelektronowa

Oznaczanie antygenów

JEŚLI, PIEF, RIM, IFA

Oznaczanie lokalnej produkcji przeciwciał

IgM, IgG, IgA: ELISA, RIA

Podejścia biologii molekularnej

Hybrydyzacja molekularna, PCR

Diagnostyka laboratoryjna zakażeń wywołanych wirusem półpaśca


Problemy diagnostyczne

Metody

Oczekiwane wyniki

Ostre zakażenie pierwotne

1

Wykrycie w ciągu 2 godzin

2

Poziom przeciwciał rośnie powoli

3

Obecne 3 dni po zakażeniu

Ostra
reaktywacja
zakażenia

1

Wykrycie UUU po 2 godzinach

2

Poziom przeciwciał rośnie powoli

4

Obecne 4 dni po pojawieniu się wysypki

  1. oznaczanie pęcherzyków VEGF w płynie;
  2. serologia: CSC, ELISA, ukierunkowana na wykrywanie
  3. serologia: ELISA mająca na celu wykrycie IgM;
  4. serologia: ELISA mająca na celu wykrywanie IgA, IgM.

Metody oznaczania odpowiedzi immunologicznej na zakażenie wirusem półpaśca

Zbliżać się

Metoda

Wykrycie wzrostu miana przeciwciał w drugiej surowicy

RSK, RTGA, RPGA, reakcja neutralizacji IF, RIM, ELISA

Wykrywanie przeciwciał klasy Ig G, Ig A w pierwszej próbce surowicy

ELISA, IF, RIM, aglutynacja lateksowa

Interpretacja wyników badania serologicznego surowic pacjentów w kierunku zakażeń wirusem opryszczki (ELISA)

Nazwa
zakażenia/marker

Średnie wartości progowe dla zakażeń

Wyniki analizy

Interpretacja

Cytomegalia anty-CMV IgG (1-20 U/ml)

Przeciwciała IgM przeciwko CMV (100-300%)

Pozytywne 1-6 Pozytywne 6-10 Pozytywne >10
Negatywne
Pozytywne 100-300 Negatywne <90 Wątpliwe 90-100

Remisja
Zaostrzenie choroby
Faza ostra choroby
Brak infekcji (choroby)
Faza ostra choroby
Powtórzyć analizę za 2-3 tygodnie

Herpes simplex 1,2 serotypy Przeciwciała
przeciw HSV 1/2 łącznie (100-900%)

Pozytywny 100-400 Pozytywny 400-800 Pozytywny >800
Negatywny <100

Remisja
Zaostrzenie choroby
Ostra faza choroby
Brak infekcji (choroby)

W tabeli przedstawiono główne metody diagnostyki laboratoryjnej zakażeń wirusem opryszczki oraz zalecane materiały biologiczne, które należy badać podczas izolacji wirusa HSV, biorąc pod uwagę lokalizację zmian opryszczkowych.

Niezawodne izolowanie wirusów opryszczki zwykłej i CMV poprzez infekowanie wrażliwych kultur komórkowych. Tak więc podczas badania wirusologicznego 26 pacjentów w okresie nawrotu, HSV został wyizolowany na wrażliwej hodowli komórkowej Vero w 23 przypadkach (88,4%). Zakażone kultury wykazały obraz działania cytopatycznego charakterystycznego dla HSV - tworzenie wielojądrowych komórek olbrzymich lub nagromadzenie zaokrąglonych i powiększonych komórek w postaci skupisk. W 52,1% przypadków ogniska działania cytopatycznego wirusa można było wykryć już po 16-24 godzinach od zakażenia. Po 48-72 godzinach inkubacji zakażonych kultur odsetek materiałów powodujących specyficzne zniszczenie komórek wzrósł do 87%. I tylko w 13% przypadków pozytywne wyniki wykryto 96 godzin po zakażeniu lub dłużej lub podczas powtarzanego pasażu.

Metody diagnostyki laboratoryjnej uogólnionego zakażenia wirusem opryszczki

Główne metody mające na celu wykrywanie (izolowanie) wirusów opryszczki, ich cząsteczek i ich składników

Metody pomocnicze mające na celu wykrywanie przeciwciał przeciwko wirusom opryszczki w płynach biologicznych, wykrywanie przesunięć enzymatycznych w surowicy krwi

Izolacja wirusów opryszczki na wrażliwych hodowlach komórkowych i zwierzęcych
Mikroskopia elektronowa bezpośrednia i immunoelektronowa
Bezpośrednie i pośrednie warianty metody immunoperoksydazy Bezpośrednie i pośrednie warianty metody przeciwciał fluorescencyjnych
Warianty metody immunoenzymatycznej fazy stałej
Warianty metody hybrydyzacji molekularnej (DNA-DNA)
Reakcja łańcuchowa polimerazy
Reakcja aglutynacji lateksowej

Test neutralizacji
Test wiązania dopełniacza
Test aglutynacji lateksowej
Pośrednia wersja metody przeciwciał fluorescencyjnych
Pośrednia wersja metody immunoperoksydazy
Warianty testu immunoenzymatycznego fazy stałej
Metoda blottingu immunologicznego Metoda
radialnego wiązania dopełniacza
Oznaczanie poziomu aminotransferazy alaninowej i asparaginianowej

Do diagnozy mononukleozy zakaźnej (zakażenia wywołanego przez EBV) stosuje się metody serologiczne. Reakcja Paula-Bunnella z czerwonymi krwinkami barana, miano diagnostyczne 1:28 lub wyższe w pojedynczym badaniu surowicy krwi lub 4-krotny wzrost przeciwciał przy badaniu par surowic. Stosuje się reakcję Hoffa-Bauera z 4% zawiesiną formalinizowanych czerwonych krwinek końskich. Wynik bierze się pod uwagę po 2 minutach; w mononukleozie zakaźnej reakcja jest wysoce specyficzna.

Obecnie opracowywana jest metoda immunoenzymatyczna (EIA) do diagnozowania mononukleozy zakaźnej. W tym przypadku przeciwciała IgG i IgM w surowicy pacjenta są oznaczane poprzez inkubację z limfoblastami zakażonymi wirusem EBV, a następnie leczenie przeciwciałami fluorescencyjnymi. W ostrym okresie choroby przeciwciała przeciwko antygenowi kapsydu wirusa są oznaczane w mianie 1:160 i wyższym.

Przy użyciu szeregu importowanych komercyjnych systemów testowych, ELISA może wykryć: przeciwciała przeciwko przeciwciałom otoczki EBV, przeciwciała przeciwko wczesnemu antygenowi EBV, całkowite przeciwciała przeciwko wczesnemu antygenowi EBV, oznaczane w ostrej fazie choroby zarówno w jądrze, jak i w cytoplazmie komórki, oraz ograniczone przeciwciała przeciwko wczesnemu antygenowi EBV, oznaczane w ostrej fazie choroby zarówno w jądrze, jak i w cytoplazmie komórki, ograniczone przeciwciała przeciwko wczesnemu antygenowi EBV, oznaczane w szczytowym stadium choroby wyłącznie w cytoplazmie komórki, oraz przeciwciała przeciwko antygenowi jądrowemu EBV. Zastosowanie tych systemów testowych pozwala na różnicową diagnostykę szeregu chorób związanych z EBV.

Po pozytywnym wyniku testu ELISA, który ujawnia przeciwciała przeciwko wirusowi EBV, wykonuje się potwierdzającą reakcję immunoblottingu, która określa obecność przeciwciał przeciwko poszczególnym białkom markerowym wirusa EBV (białkom p): p23, p54, p72 (obecność tego białka wskazuje na możliwość namnażania się wirusa EBV), p 138. Powyższe metody laboratoryjne stosuje się również w celu monitorowania skuteczności leczenia.

Czułość metod wirusologicznych wynosi 85-100%, swoistość 100%, czas badania 2-5 dni. W pracy praktycznej często stosuje się metodę bezpośredniej immunofluorescencji (DIF) z przeciwciałami poliklonalnymi lub monoklonalnymi przeciwko HSV-1 i HSV-2. Metoda DIF jest dość łatwo odtwarzalna w regularnym laboratorium klinicznym, nie jest droga, czułość wynosi powyżej 80%, swoistość 90-95%. Mikroskopia immunofluorescencyjna ujawniła obecność inkluzji cytoplazmatycznych, cechy morfologiczne, odsetek zakażonych komórek w rozmazach-skrobinach z cewki moczowej, kanału szyjki macicy, szyjki macicy, odbytnicy.

Metoda PIF dostarcza informacji o właściwościach morfologicznych komórek i zmianach w lokalizacji antygenów HSV. Oprócz bezpośrednich oznak uszkodzenia komórek przez wirusy opryszczki (wykrywanie specyficznej luminescencji), istnieją pośrednie oznaki zakażenia opryszczką według danych PIF:

  • agregacja materii jądrowej, oderwanie kariolemmy;
  • obecność tzw. jąder „dziurkowych”, gdy z jądra komórkowego pozostaje tylko jedna kariolemma;
  • obecność inkluzji wewnątrzjądrowych - ciałek Cowdry'ego.

Podczas wykonywania PIF lekarz otrzymuje nie tylko jakościową, ale i ilościową ocenę stanu zakażonych komórek, którą wykorzystaliśmy do oceny skuteczności terapii przeciwwirusowej acyklowirem (AC). Tak więc 80 pacjentów z opryszczką narządów płciowych (GH) zostało przebadanych metodą PIF w dynamice. Wykazano, że jeśli przed leczeniem acyklowirem 88% pacjentów miało wysoki odsetek zakażonych komórek (50-75% i więcej) w rozmazach, to po jednym cyklu acyklowiru zdrowe komórki wykryto w rozmazach 44% pacjentów, w 31% przypadków odnotowano pojedyncze zakażone komórki, a u 25% pacjentów było do 10% zakażonych komórek.

Zawartość zakażonych komórek w rozmazach (reakcja PIF) u pacjentów z opryszczką narządów płciowych leczonych acyklowirem

Okresy choroby

Zawartość procentowa w rozmazach

Zakażone komórki


Komórki normalne

Ponad
75%

50-75%

40-50%

10%

Pojedyncze komórki w polu widzenia

Nawrót (przed leczeniem)

25%

63%

12%

(20)

(50)

(10)

Remisja (po leczeniu)

25%

31%

44%

(20)

(25)

(35)

Stosując od wielu lat metodę PIF i hybrydyzacji punktowej, zauważono, że wyniki badania pokrywają się w prawie 100% przypadków. Należy zauważyć, że w celu zwiększenia wiarygodności diagnozy opryszczki, zwłaszcza w przypadkach postaci subklinicznej i słabo manifestującej się, zaleca się stosowanie w pracy 2-3 metod diagnostyki laboratoryjnej, zwłaszcza podczas badania kobiet w ciąży, kobiet z niekorzystnym wywiadem położniczym i osób z nieokreśloną diagnozą ginekologiczną.

Tak więc w diagnostyce PCR zakażeń wirusowych i bakteryjnych układu moczowo-płciowego konieczna jest ocena uzyskanych wyników dodatnich, biorąc pod uwagę wywiad, obecność (lub brak) specyficznych objawów klinicznych choroby. Jeśli chlamydia zostanie wykryta za pomocą PCR, to w takim przypadku istnieje duże prawdopodobieństwo zakażenia i kwestie terapii mogą zostać odpowiednio rozstrzygnięte. W przypadku wykrycia mykoplazm (ureaplazm), które są mikroorganizmami oportunistycznymi, konieczne są dodatkowe badania kulturowe w celu potwierdzenia diagnozy, tj. posiew materiału od pacjenta na wrażliwe hodowle komórkowe. Dopiero w przypadku uzyskania wyników dodatnich w analizie kulturowej możemy mówić o laboratoryjnym potwierdzeniu rozpoznania mykoplazmozy. Ta sama metoda pozwoli, jeśli to konieczne, określić wrażliwość wyizolowanych mykoplazm na często stosowane formy dawkowania (antybiotyki, fluorochinolony itp.).

Możliwe jest jednoczesne zakażenie kilkoma wirusami z rodziny Herpesviridae. Często wykrywaliśmy zakażenie jednego pacjenta wirusami HSV-1, HSV-2 i CMV. Pacjenci z objawami klinicznymi i laboratoryjnymi wtórnego IDS (pacjenci onkohematologiczni, onkologiczni, zakażeni HIV) byli istotnie częściej zakażani kilkoma wirusami opryszczki. Wykazano zatem, że zaburzeniom klinicznym i immunologicznym postępującym w zakażeniu HIV towarzyszy wzrost liczby wirusów opryszczki wykrywanych metodą hybrydyzacji molekularnej. W tym przypadku najbardziej istotne prognostycznie może być złożone jednoczesne wykrywanie DNA typu HSV-1, CMV i HHV-6.

trusted-source[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ]

You are reporting a typo in the following text:
Simply click the "Send typo report" button to complete the report. You can also include a comment.