Diagnoza opryszczki

Diagnoza opryszczki opiera się na prowadzeniu klasycznego przelania wirusa w hodowlach wrażliwy komórkowych, immunofluorescencji i metod serologicznych, przeprowadzenie badania kolposkopowe z wykorzystaniem nowoczesnych metod biologii molekularnej (PCR, dot-hybrydyzacja), co pozwala zdiagnozować wszystkie grupy wirusem opryszczki tym HHV-6 i HHV-7 typy.

Metody laboratoryjnej diagnozy infekcji herpetic

Główne metody miały na celu wydzielanie HSV lub wykrywanie cząstek wirusowych i / lub ich składników	Metody pomocnicze mające na celu wykrywanie przeciwciał przeciwko HSV w płynach biologicznych organizmu człowieka
Izolacja HSV w wrażliwych hodowlach komórek i zwierząt Bezpośrednia i immunologiczna mikroskopia elektronowa Bezpośrednie i pośrednie opcje MFA IFA Molekularne metody biologiczne Reakcja aglutynacji lateksu	Reakcja zobojętniania RSK Oznaczanie przeciwciał dla niestrukturalnych białek HSV-1,2

Wykazano, że 76% pacjentów ma opryszczkę narządów płciowych (GH) wywołaną przez HSV-2, a w 24% - typ HSV-1. A GG jako monoterapia wystąpiła tylko u 22% pacjentów, w 78% przypadków wykryto asocjacje drobnoustrojów. U 46% pacjentów wykryto parazytocenozę wywołaną przez dwa patogeny, w tym chlamydię wykryto w 40% przypadków. Rzadziej w rozmazach zdeterminowanych gardnerelly, Trichomonas, gonococci.

U 27% pacjentów pasożytocenoza była reprezentowana przez trzy, a 5,2% przez cztery patogeny. Ponadto częściej odnotowywano połączenie chlamydii z Gardnerella i grzybów z rodzaju Candida. Te dane uzasadniają konieczność dokładnego bakteriologicznego badania pacjentów YY określenia chorobotwórczych kombinacji środka, jak również szczegółowe badania patogenezy mieszanych infekcji przewodu moczowo-płciowego, co pozwoliłoby na zróżnicowanej kompleksowej terapii infekcji HSV.

Materiały badane w izolacji HSV w zależności od lokalizacji zmian herpesyjnych

Lokalizacja zmian	Zawartość pęcherzyków	Skrobanie komórek				SDC	Aspirat z oskrzeli	Bioptat	Krew
		1	2	3	4
Skóra	+								+
Oczy			+						+
Genitalia				+					+
Anus	+				+				+
Usta	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Lekki		+					+		+
Wątroba								+	+
Wrodzona opryszczka	+	+	+				+		+

Metody laboratoryjnej diagnozy infekcji wirusem cytomegalii

Metody	Czas wymagany do uzyskania wyników	Uwagi
WIRUSOLOGICZNE
Mikroskopia elektronowa	3 godziny	Dudnienie
Izolacja wirusa w hodowli komórkowej (CPD)	4-20 dni	Standardowy, wolny
Barwienie immunofluorescencyjne wczesnej AH z przeciwciałami monoklonalnymi	6 godzin	Mniej szczegółowe
CYTOLOGICZNY	2-3 godziny	Mniej szczegółowe
SEOLOGICZNE
RSK	2 dni	Standart
Ssubsistence	1 dzień	Żmudny
REEF	6 godzin	Prosty, specyficzny
NFIF	6 godzin	Skomplikowane
RIMF	6 godzin	Skomplikowane
IFA (IgM, TO)	6 godzin	Szybki, prosty
Immunoblot	6 godzin	Drogie
MOLEKULARNY-BIOLOGICZNY
MG	5-7 dni	Kosztowne, czasochłonne
PCR	3 godziny	Drogie

Metody diagnozowania wirusa półpaśca

Metody diagnostyczne	Techniki laboratoryjne
POŚREDNIA
Przydział	Hodowla tkanek, zarodki kurzych zwierząt laboratoryjnych, współhodowlanie z komórkami permisywnymi lub wirusami pomocniczymi
Identyfikacja izolatów	Reakcja zobojętniania, DSC, IF, IPPE, reakcja izolatów osadu, aglutynacja, IF
BEZPOŚREDNIO
Cytologia	Smears: immunofluorescencja barwy
Histologii	Patomorfologia komórki
Struktura	Mikroskopia embrionalna, mikroskopia immunoelektroniczna
Oznaczanie antygenów	IF, PIÉF, RIM, IFA
Oznaczanie lokalnej produkcji przeciwciał	Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA
Molekularne podejścia biologiczne	Hybrydyzacja molekularna, PCR

Diagnostyka laboratoryjna infekcji spowodowanej wirusem herpes zoster

Problemy diagnostyczne	Metody	Oczekiwane wyniki
Ostra pierwotna infekcja	1	Wykrywanie po 2 godzinach
	2	Poziom przeciwciał rośnie powoli
	3	Prezentuj 3 dni po infekcji
Ostra reaktywowana infekcja	1	Wykrywanie ULV w 2 godziny
	2	Poziom przeciwciał rośnie powoli
	4	Obecne 4 dni po pojawieniu się wysypki

1. oznaczanie w płynie pęcherzyków WIEF;
2. serologia: DSC, ELISA, mająca na celu identyfikację
3. serologia: ELISA, mająca na celu wykrycie IgM;
4. serologia: ELISA, mająca na celu wykrycie IgA, IgM.

Metody wskazujące odpowiedź immunologiczną infekcji spowodowanej wirusem herpes zoster

Podejście	Metoda
Wykrywanie zwiększonego miana przeciwciał w drugiej surowicy	RSK, RTGA, RPGA, reakcja neutralizacji IF, RIM, ELISA
Wykrywanie przeciwciał swoistych dla klasy IgG, Ig A w pierwszej próbce surowicy	IFA, IF, RIM, aglutynacja lateksowa

Interpretacja wyników badania serologicznego surowic pacjenta na infekcje wirusem herpeswirusa (ELISA)

Nazwa infekcji / znacznika	Średnie progi dla infekcji
	Wyniki analizy	Interpretacja
Cytomegalia IgG przeciw CMV (1-20 E / ml) Anty-CMV IgM (100-300%)	Pozytywna 1-6 Dodatnia 6-10 Dodatnia> 10 Negatywna pozytywna 100-300 Negatywna <90 Wątpliwa 90-100	Remisja Pogłębienie się choroby Ostra faza choroby Brak infekcji (choroba) Ostra faza choroby Powtórz analizę po 2-3 tygodniach
Opryszczka prosta 1,2 serotypy Anti-HSV 1/2 ogółem. (100-900%)	Pozytywna 100-400 Pozytywna 400-800 Dodatnia> 800 Ujemna <100	Remisja Pogłębienie się choroby Ostra faza choroby Brak infekcji (choroba)

Tabela przedstawia główne metody diagnostyki laboratoryjnej zakażeń wirusem opryszczki, a także zaleca materiały biologiczne, które są badane w izolacji HSV, biorąc pod uwagę lokalizację zmian herpesyjnych

Wiarygodne jest przydzielanie opryszczki pospolitej i CMV poprzez infekcję wrażliwych kultur komórkowych. Tak więc, w badaniu wirusologicznym 26 pacjentów w okresie nawrotu, HSV wyizolowano na wrażliwej hodowli komórek Vero w 23 przypadkach (88,4%). W zakażonych hodowlach zaobserwowano wzór działania cytopatycznego charakterystycznego dla HSV - tworzenie wielojądrowych komórek olbrzymich lub akumulację zaokrąglonych i powiększonych komórek w postaci pęków. W 52,1% przypadków udało się wykryć ogniska cytopatycznego działania wirusa w ciągu 16-24 godzin po zakażeniu. Po 48-72 godzinach inkubacji zainfekowanych hodowli odsetek materiałów powodujących konkretne zniszczenie komórek wzrósł do 87%. I tylko w 13% przypadków, pozytywne wyniki zostały wykryte 96 godzin po infekcji i więcej lub z powtarzanym pasażowaniem.

Metody diagnostyki laboratoryjnej uogólnionej infekcji herpetic

Główne metody miały na celu wykrywanie (izolację) herpeswirusów, ich cząstek i ich składników	Metody pomocnicze mające na celu wykrywanie przeciwciał w wirusach opryszczki w płynach biologicznych, wykrywanie zmian enzymatycznych w surowicy krwi
Izolacja wirusa Herpes podatnych na hodowlach komórkowych i zwierząt mikroskopii elektronowej bezpośrednie i odporny metody pośrednie i bezpośrednie immunoperoksydazowej postaciach bezpośrednie i pośrednie opcji technika fluorescencyjnych przeciwciał pod ELISA przykłady wykonania cząsteczkowej (DNA) hybrydyzację DNA Polymerase Chain Reaction reakcji aglutynacji lateksowej	Neutralizacja dopełniacza reakcję utrwalania reakcja aglutynacji lateksowej Pośrednia metoda fluorescencji przeciwciał wykonania pośrednia wariant metody immunoperoksydazowej Przykłady ELISA Sposób immunologicznego blotting zamocowanie promieniowego Metoda dopełniacza oznaczania poziomów alaniny i asparaginianu

Aby zdiagnozować mononukleozę zakaźną (zakażenie wywołane przez VEB), stosuje się metody serologiczne. Reakcja Paul'a Bunnel'a z erytrocytami barana, miano diagnostyczne 1:28 i wyższe z pojedynczym badaniem surowicy lub 4-krotny wzrost przeciwciał w badaniu sparowanych surowic. Użyj reakcji Goff-Bauera z zawiesiną 4% sformalizowanych krwinek czerwonych konia. Wynik brany jest pod uwagę po 2 minutach, przy mononukleozie zakaźnej reakcja jest bardzo specyficzna.

Obecnie opracowywany jest test immunoenzymatyczny (ELISA) do diagnozowania mononukleozy zakaźnej. W tym przypadku przeciwciała IgG i IgM w surowicy pacjenta określa się przez inkubację z limfoblastami zakażonymi EBV, a następnie leczenie przeciwciałami fluorescencyjnymi. W ostrym okresie choroby przeciwciała przeciwko wirusowemu antygenowi kapsydu określa się w mianie 1: 160 i powyżej.

Przy użyciu wielu importowanych komercyjnych systemów testowych w IFA można zidentyfikować Przeciwciała ANT przeciwciał otoczki Egan EBV wczesnego antygenu EBV ogólnym przeciwciała do wczesnego antygenu EBV, określonej w ostrej fazie choroby, w jądrze i cytoplazmie i ograniczoną przeciwciała EBV wcześniej, określa się w ostrej fazie choroby, w jądrze i cytoplazmie komórek, ograniczony przeciwciał EBV wczesnego antygenu, określane w środku choroby tylko w cytoplazmie komórek i przeciwciał EBV antygenu jądrowego. Zastosowanie tych systemów testowych umożliwia diagnostykę różnicową szeregu chorób związanych z EBV.

Po pozytywnej ELISA w celu zidentyfikowania przeciwciał EBV dają immunoblot potwierdzającą odpowiedź, które wykrywają obecność przeciwciał w celu oddzielenia białek markerowych EBV (p-białka): P23, P54, P72 (obecność białka sugeruje możliwości reprodukcji EBV), str 138. Wspomniany powyższe metody laboratoryjne służą do kontroli skuteczności leczenia.

Czułość metod wirusologicznych wynosi 85-100%, swoistość wynosi 100%, czas badania wynosi 2-5 dni. Często w praktyce stosuje się metodę bezpośredniej immunofluorescencji (PIF) z przeciwciałami poliklonalnymi lub monoklonalnymi przeciwko HSV-1 i HSV-2. Metoda UIF może być z łatwością odtworzona w konwencjonalnym laboratorium klinicznym, nie jest kosztowna, czułość przekracza 80%, specyficzność wynosi 90-95%. Mikroskopia immunofluorescencyjna wykazała obecność wtrętów cytoplazmatycznych, cechy morfologiczne, procent zainfekowanych komórek w wymazach - zeskroby z cewki moczowej, kanału szyjki macicy, szyjki macicy, odbytnicy.

Metoda UIF daje wyobrażenie o właściwościach morfologicznych komórek i zmianach w lokalizacji antygenów HSV. Oprócz bezpośrednich objawów uszkodzenia komórek przez wirusy opryszczki (wykrywanie specyficznej luminescencji), istnieją pośrednie objawy infekcji herpetic zgodnie z danymi UIF:

• agregacja materii jądrowej, złuszczanie karyoolmy;
• obecność tzw. Jądra "dziury", gdy tylko jeden kariolemma pozostaje z jądra komórki;
• obecność wtrętów wewnątrzjądrowych - łydka Caudry'ego.

Podczas ustawiania UIF lekarza odbiera nie tylko wysokiej jakości, ale również ilościową ocenę zakażonych komórek, które zostały wykorzystane do oceny skuteczności leczenia przeciwwirusowego z acyklowir (AC). Tak więc 80 pacjentów z prostą opryszczką narządów płciowych (GG) badano metodą dynamiczną w UIF. Wykazano, że w przypadku, przed podaniem acyklowiru w rozmazach 88% pacjentów wysokiego odsetka zakażonych komórek (50-75% i więcej), po jednym obrocie acyklowiru w rozmazach 44% pacjentów ze zdrowymi komórkami wykryte w 31% przypadków są zaznaczone poszczególne zainfekowanych komórek i 25% pacjentów miało do 10% zainfekowanych komórek.

Zawartość zainfekowanych komórek w wymazach (reakcja PIF) pacjentów z opryszczką narządów płciowych leczonych acyklowirem

Okresy choroby	Procent w rozmazach
	Zainfekowane komórki					Normalne komórki
	Ponad 75%	50-75%	40-50%	10%	Pojedyncze komórki w n / sp
Nawrót (przed leczeniem)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remisja (po leczeniu)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Wykorzystując wiele lat UIF i metodę hybrydyzacji dot, prawie 100% przypadków zbiega się z wynikami badania. Należy zauważyć, że w celu zwiększenia niezawodności diagnozy GH, szczególnie w przypadkach, gdy istnieje subkliniczną i malomanifestnyh formy opryszczkę, zaleca się stosowanie metody diagnostyki laboratoryjnej 2-3, zwłaszcza przy badaniu kobiety w ciąży, kobiety z położniczego historii niekorzystnej sytuacji, osoby o nieokreślonym ginekologicznej diagnozy.

Tak więc, przy diagnostyce wirusowo-bakteryjnej układu moczowo-płciowego, konieczna jest ocena uzyskanych pozytywnych wyników z uwzględnieniem wywiadu, obecności (lub nieobecności) specyficznych objawów klinicznych choroby. Jeśli wykrycie chlamydii za pomocą PCR, wówczas można mówić o zakażeniu i odpowiednio rozwiązać problemy terapii. W przypadku wykrycia mikoplazm (ureaplasma), które są mikroorganizmami oportunistycznymi, wymagane są dodatkowe badania kulturowe, aby potwierdzić diagnozę, czyli wysiew materiału od pacjenta do wrażliwych hodowli komórkowych. Dopiero gdy w analizie kultury uzyskamy pozytywne wyniki, możemy mówić o laboratoryjnym potwierdzeniu rozpoznania mykoplazmozy. Ta sama metoda pozwoli, jeśli to konieczne, określić wrażliwość izolowanych mykoplazm na często stosowane formy medyczne (antybiotyki, fluorochinolony itp.).

Być może jednoetapowa infekcja kilkoma wirusami z rodziny Nepresviridae. Często wykryliśmy zakażenie jednego pacjenta wirusami HSV-1, HSV-2 i CMV. O wiele częściej zakażano się kilkoma wirusami opryszczki u pacjentów z klinicznymi i laboratoryjnymi objawami wtórnego IDS (pacjenci z onkohematologią, onkologicznymi, zakażonymi wirusem HIV). Tak więc wykazano, że zaburzeniom klinicznym i immunologicznym postępującym w zakażeniu HIV towarzyszy wzrost liczby wirusów opryszczki wykrytych metodą hybrydyzacji molekularnej. W tym prognostycznie najbardziej znaczącym można uznać kompleksowe jednoetapowe wykrywanie DNA typu HSV-1, CMV i HHV-6.

[1], [2], [3]