Wirus zapalenia wątroby typu E

Wirus zapalenia wątroby typu E (HEV) ma kształt kulisty, średnicę 27-34 nm, symetrię nukleokapsydu ikozaedryczną, nie posiada błony zewnętrznej.

Wirus zapalenia wątroby typu E zidentyfikowano w kale pacjentów, u których wystąpiło zapalenie wątroby typu innego niż A, innego niż B drogą dojelitową, a także w kale zwierząt doświadczalnych (małp) zakażonych materiałem zawierającym ten sam wirus. Badanie przeprowadzono metodą immunomikroskopii elektronowej (IEM) z wykorzystaniem surowicy ozdrowieńców z tego zapalenia wątroby.

Dotychczas ustalono, że wirus zapalenia wątroby typu E posiada następujące cechy fizykochemiczne i biologiczne.

• Morfologicznie wirus ten ma postać kulistych cząstek bez otoczki, na ich powierzchni znajdują się kolce i zagłębienia. Wirus rozpada się pod wpływem CS CL, zamrażania/rozmrażania i zachowuje świeżość w temperaturze -20 °C.
• Średnica cząstek wirusa wynosi od 32 do 34 nm.
• Genom jest reprezentowany przez RNA o długości 7,5 kb, jednoniciowy, poliadenylowany.
• Współczynnik sedymentacji wynosi 183 S (dla wadliwych cząstek wirusopodobnych - 165 S). Gęstość wyporu wynosi 1,29 g/cm3 ^w gradiencie KTa/Glu.
• Hodowla in vitro nie powiodła się.
• Podanie śródmózgowe zawiesiny wyciągu kałowego zawierającego cząsteczki HEV ssącym myszom nie wywołuje u nich choroby.

Za pomocą klonowania molekularnego uzyskano duże ilości HEV z żółci zakażonych makaków. Wykazano tożsamość cząstek wirusa uzyskanych z wyciągów kałowych pacjentów z zapaleniem wątroby typu E w różnych regionach świata (Somalia, Borneo, Pakistan, Azja Środkowa itp.). Struktura genomu HEV została praktycznie rozszyfrowana. Poprzez analizę sekwencji nukleotydowych i organizacji genomu ustalono, że HEV różni się od pikornawirusów i że nie może należeć do kaliciwirusów (caliciviruses), jak początkowo zakładano.

Genom jest reprezentowany przez jednoniciowy, niefragmentowany pozytywny RNA o długości 7500 zasad, zawiera trzy otwarte ramki odczytu kodujące białka specyficzne dla wirusa. Na powierzchni wirionu znajdują się zagłębienia przypominające kielichy (grecki kielich), dlatego wirus został początkowo zaliczony do rodziny Caliciviridae (rodzaj Hepavirus). Bardziej szczegółowe badanie genomu HEV wykazało, że sekwencja nukleotydów jego RNA jest unikalna i wykazuje jedynie pewne podobieństwo do wirusa różyczki.

HEV jest obecnie klasyfikowany jako wirus zapalenia wątroby typu E, należący do rodziny Hepereviridae, rodzaju Heperevirus.

Antygen(y) HEV - HEV Ag zidentyfikowano na powierzchni cząstek wirusa za pomocą immunomikroskopii elektronowej, w hepatocytach - metodami immunohistochemicznymi. U zwierząt doświadczalnych (makaki i szympansy) chorych na zapalenie wątroby typu E, HEV Ag wykryto w cytoplazmie hepatocytów za pomocą metody immunofluorescencji podczas warstwowania skrawków wątroby z surowicami od tych samych zwierząt uzyskanymi w okresie rekonwalescencji; swoistość HEV Ag potwierdzono następnie w badaniach absorpcyjnych z wykorzystaniem białek rekombinowanych uzyskanych przez klonowanie genomu HEV.

W badaniach immunomorfologicznych małp zakażonych wirusem zapalenia wątroby typu E, ziarniste złogi HEV Ag były zlokalizowane w cytoplazmie hepatocytów, przy czym granulki zawierające HEV Ag były zlokalizowane losowo, a liczba granulek różniła się znacząco w różnych komórkach. Nie wykryto preferencyjnej lokalizacji hepatocytów HEV Ag-pozytywnych w żadnej konkretnej strefie zrazika wątroby. Zapalenie wątroby zawierające HEV Ag było stale wykrywane przed wzrostem aktywności ALT, następnie utrzymywało się przez cały okres hiperenzymemii i praktycznie zniknęło po normalizacji aktywności ALT.

Sekwencje genomowe HEV zidentyfikowano w kale, żółci i surowicy krwi pacjentów z zapaleniem wątroby typu E u ludzi i zwierząt doświadczalnych (małp); badano odpowiedź humoralną układu odpornościowego od ostrej fazy choroby do okresu rekonwalescencji.

Najwyższe stężenie cząstek HEV wykryto w żółci zakażonych makaków przed osiągnięciem szczytu aktywności ALT w fazie zakażenia, kiedy to odnotowano szczyt obecności HEV Ag w wątrobie.

Obecność RNA wirusa HEV wykryto w próbkach kału, żółci i surowicy pobranych od zakażonych ludzi i naczelnych.

Obecność swoistych przeciwciał (anty-HEV) w surowicy krwi pacjentów z zapaleniem wątroby typu E u ludzi i zwierząt doświadczalnych potwierdzono za pomocą immunomikroskopii elektronowej i metody przeciwciał fluorescencyjnych, stosując preparaty cząstek HEV lub skrawki wątroby zawierające HEV Ag jako substrat.

Dalsze badania przekrojowe izolatów HEV i surowic ozdrowieńców, pobranych od pacjentów z różnych regionów geograficznych, w których występowały ogniska lub sporadyczne przypadki zapalenia wątroby typu E, jak również cząsteczek HEV i surowic pobranych od naczelnych zakażonych tymi izolatami, ostatecznie przekonały badaczy, że na całym świecie za zapalenie wątroby typu E odpowiada jeden wirus (lub klasa serologicznie powiązanych wirusów).

Przedstawiono różnorodność genotypową HEV. Zidentyfikowano osiem genotypów wirusa, których głównymi prototypami były następujące izolaty: genotyp 1 - izolat HEV z Birmy, 2 - z Meksyku, 3 - ze Stanów Zjednoczonych, 4 - z Tajwanu i Chin, 5 - z Włoch, 6 - z Grecji, 7 - z Grecji (drugi izolat), 8 - z Argentyny.

Wykazano, że w ostrej fazie zapalenia wątroby typu E u makaków i szympansów w surowicy krwi krążą przeciwciała klasy IgM i IgG anty-HEV, natomiast w surowicach okresu rekonwalescencji stwierdza się jedynie przeciwciała klasy IgM anty-HEV.

W licznych badaniach wykryto przeciwciała IgM przeciwko HEV u 73% pacjentów chorych na zapalenie wątroby typu E w ciągu pierwszych 26 dni od wystąpienia żółtaczki; w okresie rekonwalescencji przeciwciała IgG przeciwko HEV wykryto u 90% pacjentów.

Źródłem zakażenia są wyłącznie ludzie, patogen wydalany jest z kałem. Mechanizm zakażenia jest fekalno-oralny. Główną drogą zakażenia jest woda zanieczyszczona kałem. Dawka zakaźna jest znacznie wyższa niż w przypadku wirusa zapalenia wątroby typu A. Podatność na wirusa HEV jest powszechna. Epidemie mogą dotknąć dziesiątki tysięcy osób, jeśli reżim picia zostanie naruszony, szczególnie podczas prac sezonowych latem i jesienią.

Klinicznie zapalenie wątroby typu E jest łagodniejsze niż zapalenie wątroby typu A, a przejścia do postaci przewlekłej nie odnotowano. U 85-90% pacjentów zapalenie wątroby typu E jest łagodne lub umiarkowane, często bezobjawowe. Jednak u kobiet w ciąży zapalenie wątroby typu E jest ciężkie, ze wskaźnikiem śmiertelności do 20%.

Mikroskopia elektronowa immunologiczna jest stosowana do diagnostyki; zaproponowano system testowy do wykrywania przeciwciał przeciwko antygenom HEV. Odporność po zakażeniu jest silna, trwa przez całe życie i jest wynikiem neutralizujących wirusa przeciwciał i komórek pamięci immunologicznej. Zaproponowano szczepionkę z całego wirionu do specyficznej profilaktyki, a szczepionki żywe i rekombinowane są opracowywane.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]