Witamina A we krwi

Wartości odniesienia (normalnego) poziomu witaminy A (retinol), w surowicy krwi: dzieci 1-6 lat - 0,7-1,5 mol / l, 7-12 - 0,91-1,71 mmol / l, 13 -19 lat - 0,91-2,51 μmol / l; u dorosłych wynosi 1,05-2,09 μmol / l.

Witaminy A odnosi się do rozpuszczalnych w tłuszczach i występuje w dwóch formach - rzeczywisty witamina A i retinolu (tylko w produktach zwierzęcych) oraz prowitamina A, znany jest jako karoten (wytworzonego pochodzenia zwierzęcego lub roślinnego), który może być przekształcony do retinolu w ścianach przewód pokarmowy. Około 50-90% retinolu przyjmowanego z pożywieniem jest wchłaniane w jelicie cienkim i transportowane w kompleksie związanym z chylomikronami do wątroby, gdzie jest przechowywane w postaci palmitynianu retinolu. Jeśli to konieczne, jest uwalniany do krwioobiegu w postaci retinolu, który jest w połączeniu z białkiem wiążącym witaminę A. W surowicy kompleks wiążący witaminę A + retinol wiąże się z transtyretyną. Od surowicy retinol jest wychwytywany przez komórki docelowe, takie jak fotoreceptory siatkówki i nabłonek.

Gdy witamina A dostanie się do organizmu w nadmiarze (180-430 μg retinolu na dzień w zależności od wieku, płci i stanu fizjologicznego), jego nadmiar osadza się w wątrobie tworząc depot tej witaminy. Przy zmniejszonym przyjmowaniu retinolu z pożywienia jego zasoby wątroby są uwalniane do krwioobiegu, utrzymując stężenie retinolu w surowicy na normalnym poziomie (powyżej 0,7 μmol / L). Inne biologicznie aktywne formy witaminy A (retinal i kwas retinowy) są obecne we krwi w bardzo niskich stężeniach (poniżej 0,35 μmol / L); na estrach retinolu stanowi około 5% całkowitej witaminy A (0,1-0,1 μmol / l).

Witamina A odgrywa ważną rolę w procesach utleniania i redukcji. Retinol wspomaga tworzenie glikogenu w wątrobie i mięśniach, wspomaga wzrost poziomu cholesterolu we krwi, bierze udział w syntezie hormonów steroidowych i płciowych. Jest to niezbędne do wzrostu i tworzenia kości szkieletu resyntezy rodopsyny, a także przyczynia się do prawidłowego funkcjonowania błon śluzowych i nabłonka skóry pokrywa, uniemożliwiając jej metaplazji, nadmierne rogowacenie i nadmierne złuszczanie. Witamina A pomaga wzmocnić włosy, zęby i dziąsła. W ostatnich latach, wykazuje zróżnicowaną rolę witaminy A w profilaktyce nowotworu i regulacji odporności (zasadniczego znaczenia dla realizacji fagocytozy, zwiększenie syntezy Ig, stymuluje produkcję limfocytów T zabójców, pobudza typu T-helper II i in.). Witamina A - aktywny przeciwutleniacz, działający głównie w obecności witaminy E; chroni witaminę C przed utlenianiem. Niedobór witaminy A jest uważany za czynnik ryzyka nowotworów złośliwych. W badaniach eksperymentalnych wykazano, że wzrost zawartości witaminy A w diecie zwiększa medianę trwania życia o 17,5%. Cynk jest niezbędnym kofaktorem metabolizmu witaminy A (niezbędnym do syntezy białka wiążącego witaminę A).

Średnie dzienne zapotrzebowanie na retinol dla dorosłych (20-50 lat) wynosi 1,2 mg (4000 jm, 1 jm odpowiada 0,3 μg retinolu), dla kobiet w ciąży - 1,5 mg (5000 jm), w okresie karmienia piersią - 1, 8 mg (6000 jm) dla osób powyżej 60 lat - 2,5 mg (10000 jm). Co najmniej jedna trzecia codziennego zapotrzebowania na retinol powinna zostać dostarczona do organizmu w gotowej formie; resztę można zaabsorbować za pomocą karotenoidów, których retinol tworzy się w organizmie. Należy pamiętać, że około 30% retinolu w środkach spożywczych ulega zniszczeniu w wyniku obróbki cieplnej. Aktywność retinolu jest 2-krotnie wyższa niż karotenu, a dodatkowo tylko 30-40% wchłaniane jest do jelita. Dlatego przy ocenie spożycia uważa się, że 1 mg retinolu w przybliżeniu odpowiada 6 mg karotenoidów.

Oznaczanie retinolu (witaminy A) i karotenoidów w surowicy według Besseya w modyfikacji LA Anisimova

Zasada metody

Oznaczanie witaminy A i karotenoidów opiera się na ich hydrolizie w roztworze alkalicznego alkoholu, a następnie ekstrakcji za pomocą mieszaniny organicznych rozpuszczalników.

Odczynniki

• 11 M roztwór wodorotlenku potasu (KOH).
• 96% alkohol etylowy.
• 1 M roztwór wodorotlenku potasu (KOH) w 96% alkoholu etylowym: 1 objętość 11 M roztworu KOH zmieszano z 10 objętościami 96% alkoholu etylowego. Odczynnik jest przygotowywany w dniu badania. Jeśli dojdzie do barwienia podczas mieszania, alkohol należy oczyścić przez destylację przed użyciem.
• Xylol, hp.
• Oktan, h.ch.
• Mieszanina ksylenoktanowa: wytworzona przez zmieszanie równych objętości ksylenu i oktanu.

Badania prowadzone są na spektrofotometrze.

Przebieg oznaczania witaminy A

Krew pobrana z palca (około 1 ml) jest dodawana do etykiety wirówki i umieszczana w szklanym naczyniu z ciepłą wodą (temperatura 40-45 ° C) przez 20-30 minut. Aby oddzielić surowicę, skrzep krwi ostrożnie nawija się wokół krawędzi rury cienkim szklanym prętem i odwirowuje przy 3000 obrotach na minutę przez 10 minut.

Wybrać 0,12 ml surowicy i przenieść do probówki do aglutynacji, a następnie dodać 0,12 ml 1 M roztworu wodorotlenku potasu. Zawartość jest mocno wstrząśnięta.

Probówki z sondami umieszcza się w kąpieli wodnej na 20 minut w temperaturze 60 ° C do hydrolizy.

Próbki ochładza się i dodaje do nich 0,12 ml mieszaniny ksylenoktanowej, energicznie wytrząsa przez 10-15 sekund. Ponownie ochłodzić i odwirować.

Ostrożnie usuń górną warstwę zawierającą witaminę A i karotenoidy za pomocą pipety Pasteura z gumową puszką i przenieś ją do mikrokuwet.

Próbki są spektrofotometryczne przy długości fali 328 nm - w celu oznaczenia witaminy A i przy długości fali 460 nm - w celu oznaczenia karotenoidów.

Po spektrofotometrii badaną próbkę poddaje się działaniu promieniowania ultrafioletowego niszczenia witaminy A. W tym celu, w odległości około 15-20 cm od ustawionej mikrokuwety kwarcu (bakteriobójcze) lampy tak, że naświetlanie odsłoniętej części kuwety, wypełnionego cieczą; czas napromieniania wynosi 45-60 minut.

Próbki są wielokrotnie spektrofotometryczne przy długości fali 328 nm. Zawartość witaminy A określa się na podstawie różnicy wartości ekstynkcji (gęstość optyczna), biorąc pod uwagę współczynnik (czynnik) 637, obliczony przez Besseya dla witaminy A.

Obliczenia przeprowadza się według wzoru:

X = 637 × (Е328 (1) - Е328 (2)),

Gdzie X oznacza zawartość witaminy A, μg / dL; 637 to współczynnik obliczony przez Besseya do oznaczania witaminy A; Е328 (1) - gęstość optyczna roztworu przed napromieniowaniem; E328 (2) to gęstość optyczna roztworu po napromieniowaniu.

Współczynnik przeniesienia stężenia witaminy A z μg / dL w μmol / l wynosi 0,035.

Zawartość karotenoidów obliczana jest według wzoru:

X = 480-Е480,

Gdzie X oznacza zawartość karotenoidów, μg / dL; 480 to współczynnik obliczony przez Besseya dla określenia karotenoidów; E480 to gęstość optyczna roztworu testowego.

Uwaga:

Według Bessey, podczas badań można przyjmować większe lub mniejsze objętości surowicy, ale jego stosunek do objętości roztworu alkoholu powinien być stały przy każdej zmianie objętości (ilości) mieszaniny ksylen-oktan.

Normą w zawartości witaminy A w surowicy krwi jest: u noworodków i niemowląt - 160-270 μg / l; u dorosłych 1,05-2,45 μmol / l (300-700 μg / l). Zawartość karotenoidów w surowicy dorosłej wynosi 800-2300 μg / l.