Mikroskopia konfokalna

Konfokalna mikroskopia jest obecnie uważana za jedną z najbardziej obiecujących metod obrazowania skóry in vivo, dlatego zainteresowanie nią zarówno wśród klinicystów, jak i wśród przedstawicieli naukowych instytutów badawczych jest niezwykle wysokie.

[1], [2], [3], [4]

Możliwości mikroskopii konfokalnej

W dermatologii konfokalna mikroskopia laserowa służy do:

• badanie przenikania związków do skóry (szlaki penetracji, kinetyka, rozmieszczenie w skórze);
• obserwacja gruczołów (definicja stanu aktywnego i pasywnego);
• badania złoża mikrokrążeniowego (w tym w czasie rzeczywistym);
• rozpoznanie nowotworów.

Nie omawiając zalet i wad wspomnianych powyżej odmian mikroskopii konfokalnej, zauważamy, że w ostatnich latach coraz większą popularność zyskała mikroskopia konfokalna z laserem fluorescencyjnym.

[5], [6], [7],

Mikroskopia konfokalna do badania skóry

Mikroskop konfokalny zapewnia dwie nieocenione możliwości - badanie tkanek na poziomie komórkowym w stanie życia fizjologicznego i demonstrowanie wyników badania (tj. Aktywności komórkowej) w czterech wymiarach - wysokości, szerokości, głębokości i czasie. W przypadku jakości obrazu i głębi badań najważniejszą rolę odgrywa zdolność tkanki do przekazywania światła, innymi słowy, jej przezroczystość. Metoda mikroskopii konfokalnej jest bezkontaktowa, promień światła nie powoduje żadnej szkody ani dyskomfortu dla pacjenta lub zwierzęcia doświadczalnego.

Do badania skóry wykorzystuje się konfokalną skaningową mikroskopię laserową (CSLM). Metoda pozwala zobaczyć warstwę naskórka i warstwy skóry brodawkowej z rozdzielczością zbliżoną do histologicznej. Wszystkie wyniki ankiety są wyświetlane na monitorze i zapisywane jako pakiet plików obrazów (w postaci mikrofilmu (w dynamice) lub mikrofotografii).

Istnieją dwa rodzaje metod:

• Refleksyjne (CSLM odbicia) - opiera się na fakcie, że różne struktury wewnątrzkomórkowe i międzykomórkowe mają różny współczynnik załamania światła, co pozwala uzyskać obraz kontrastowy.
• fluorescencja (fluorescencja CSLM) - wykorzystuje światło lasera, które penetruje skórę i wzbudza w nim egzo- lub endochromofory, które w odpowiedzi zaczynają emitować fotony (tj. Fluoryzują).

Rozdzielczość poprzeczna to minimalna odległość między punktami znajdującymi się na płaszczyźnie poziomej, tj. Płaszczyzna równoległa do powierzchni skóry. Rozdzielczość osiowa to minimalna odległość między punktami znajdującymi się na płaszczyźnie prostopadłej do powierzchni skóry.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Historia mikroskopii konfokalnej

Pomysł stworzenia mikroskopu zdolnego na poziomie komórkowym do pokazania śródszpikowego cięcia żywej tkanki został aktywnie opracowany 130 lat temu. Główny element nowoczesnych mikroskopów powstał pod koniec XIX wieku i był wirującym dyskiem z najmniejszymi otworami umieszczonymi spiralnie. Płyta ta została wynaleziona w 1883 roku przez niemieckiego studenta Paula Nipkova, na cześć którego otrzymał swoje imię - dysk Nipkov (lub dysk nipkova). Wynalazek opierał się na zdolności światła przechodzącego przez najmniejsze otwory w dysku i soczewce powiększającej, aby penetrować do głębokości tkanki i oświetlać fragment komórki w pewnej odległości od powierzchni. Gdy dysk obraca się szybko, fragmenty są dodawane do ogólnego obrazu. Usuwając lub przybliżając strukturę obiektu, można zmieniać głębokość optycznego przekroju badanej tkanki.

Dopiero wraz z pojawieniem się VTR w latach 80. I komputerami zdolnymi do przetwarzania obrazów, we wczesnych latach 90. Istniała realna możliwość stworzenia i efektywnego zastosowania tych nowoczesnych mikroskopów, które są używane w naszych czasach.