PCR jako metoda diagnozowania chorób genetycznych
Ostatnia recenzja: 23.04.2024
Cała zawartość iLive jest sprawdzana medycznie lub sprawdzana pod względem faktycznym, aby zapewnić jak największą dokładność faktyczną.
Mamy ścisłe wytyczne dotyczące pozyskiwania i tylko linki do renomowanych serwisów medialnych, akademickich instytucji badawczych i, o ile to możliwe, recenzowanych badań medycznych. Zauważ, że liczby w nawiasach ([1], [2] itd.) Są linkami do tych badań, które można kliknąć.
Jeśli uważasz, że któraś z naszych treści jest niedokładna, nieaktualna lub w inny sposób wątpliwa, wybierz ją i naciśnij Ctrl + Enter.
PCR jest nowym osiągnięciem w genetyce molekularnej, używanym do amplifikacji DNA i pozwala na szybką replikację specyficznej części DNA (czyli dowolnego genu) in vitro ponad 200 000 razy. Aby przeprowadzić reakcję, wystarczy posiadać materiał DNA z jednej komórki; ilość DNA amplifikowanego przez PCR jest tak duża, że DNA można po prostu wybarwić (stosując sondy radioaktywne po tym, jak nie jest wymagana elektroforeza). Warunkiem prowadzenia PCR jest znajomość sekwencji nukleotydowej zamplifikowanego regionu DNA dla właściwej selekcji syntetycznie zsyntetyzowanych starterów.
Obecnie PCR jest procesem, który odbywa się w pojedynczej probówce i składa się z powtarzających się cykli amplifikacji (powielania, kopiowania) specyficznej sekwencji cząsteczki DNA w celu uzyskania dostatecznie dużej liczby kopii, które można zidentyfikować za pomocą elektroforezy. Jednym z kluczowych składników reakcji są "startery" - syntetyczne oligonukleotydy składające się z 20-30 zasad, komplementarne do "miejsc" (sekcje) hybrydyzacji (przyłączania) w zidentyfikowanym miejscu matrycowego DNA.
PCR przebiega automatycznie w programowalnym termostacie - termocyklerze (termocyklerze). Cykl składający się z trzech etapów, który powoduje replikę możliwej do zidentyfikowania części wzorcowego DNA, powtarza się 30 do 50 razy zgodnie z zaprogramowanym programem termocyklera. W pierwszym cyklu oligopamery hybrydyzują z oryginalnym matrycowym DNA, a następnie (w kolejnych cyklach) i z nowo zsyntetyzowanymi cząsteczkami DNA, gdy akumulują się w mieszaninie reakcyjnej. W tym drugim przypadku synteza DNA nie kończy się z powodu zmiany reżimu temperatury, ale po osiągnięciu granicy polimerazy DNA zamplifikowanego regionu, który określa wielkość nowo zsyntetyzowanego regionu DNA w obrębie jednego nukleotydu.
Jako metodę wykrywania otrzymanych cząsteczek DNA stosuje się elektroforezę, za pomocą której amplifikowany materiał dzieli się zgodnie z rozmiarem amplikonów (produkty amplifikacji).
Za pomocą PCR można bezpośrednio badać miejsca lokalizacji podejrzanych mutacji lub miejsc polimorficznych, a także badać obecność jakichkolwiek innych specyficznych cech DNA.
[