Wirus zapalenia wątroby typu A

Wirusowe zapalenie wątroby A jest ludzką chorobą zakaźną charakteryzującą się dominującym uszkodzeniem wątroby i objawia się odurzeniem klinicznym i żółtaczką. Wirus Hepatitis A został wykryty w 1973 roku przez S. Feinstone (i inne) przy użyciu metody mikroskopii elektronowej odpornej oraz przez infekowanie małp - szympansów i marmozetów. Istotą metody immuno-mikroskopii elektronowej jest to, że swoiste przeciwciała (surowica rekonwalescencji) dodaje się do filtratu kału pacjenta z zapaleniem wątroby typu A, a osad poddaje się mikroskopii elektronowej. Ze względu na interakcję wirusów z określonymi przeciwciałami, podlegają one specyficznej agregacji. W tym przypadku są łatwiejsze do wykrycia, a agregacja pod wpływem przeciwciał potwierdza specyficzność patogenu. Odkrycie S. Feinstone zostało potwierdzone w eksperymentach na ochotnikach.

Wirus zapalenia wątroby typu A ma sferyczny kształt, średnica wirionu wynosi 27 nm. Genom jest reprezentowany przez jednoniciowy dodatni RNA o masie 2,6 MD. Supercapsid jest nieobecny. Typ symetrii to sześcienny - dwudziestościan. Kapsyd ma 32 kapsomery, jest utworzony przez cztery polipeptydy (VP1-VP4). Poprzez swoje właściwości wirus zapalenia wątroby typu A należy do rodzaju Heparnovirus, rodzina Picornaviridae. Pod względem antygenowym wirus zapalenia wątroby typu A (HAV - wirus zapalenia wątroby typu A) jest jednorodny. HAV dobrze się namnaża w organizmie szympansów, pawiorków, hamadryli i małp hazardowych (marmozet). Przez długi czas wirus nie mógł kultywować. Tylko w latach 80. Możliwe było uzyskanie hodowli komórkowych, w których rozprzestrzenia się HAV. Początkowo do tych celów wykorzystano transplantowane linie nerek z małpy rezus (hodowla FRhK-4), a teraz - przeszczepioną linię komórek nerkowych u zielonych małp (kultura 4647).

Zgodnie z zaleceniami ekspertów WHO przyjęto następujące nazewnictwo markerów wirusa zapalenia wątroby typu A: wirus zapalenia wątroby typu A-NAU przeciw wirusowi zapalenia wątroby typu A: IgM anty-NAV i IgG przeciwko NAV.

HAV to małe cząsteczki o średnicy 27-30 nm, o symetrii icosaedrycznej i jednorodnej. Na wykresie dyfrakcji elektronów uzyskanym metodą agregacji immunologicznej wykrywa się cząstki gęstoziarniste z powierzchownie położonymi symetrycznie rozmieszczonymi kapsomerami. W przypadku negatywnego kontrastowania w preparatach wykrywane są zarówno pełne, jak i puste cząsteczki. Nukleokapsydowy NAV, w przeciwieństwie do wirusa grypy, nie ma wypukłości powierzchni i błon. Ważne jest również, że wirus HAV nie ma struktury w kształcie serca.

Według jego właściwości fizyko-chemicznych wirus zapalenia wątroby typu A związanego z rodziny Picornaviridae, rodzaj Enterovirus o liczbie atomowej 72. Jednak to taksonomia była zbyt niezwykła, i uznały ją za możliwe do opuszczenia terminologii „Wirus Hepatitis A”.

Podobnie jak wszystkie wirusy z rodziny Picornaviridae, wirus zapalenia wątroby typu A zawiera kwas rybonukleinowy. Niektóre laboratoria wykazały możliwość klonowania genomu wirusa zapalenia wątroby typu A, co otwiera perspektywę uzyskania preparatów szczepionek.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

Oporność wirusa zapalenia wątroby typu A.

Wirus jest stosunkowo odporny na wysokie temperatury, kwasy, tłuszczowe rozpuszczalniki (nie ma lipidów), środki dezynfekujące, dobrze znosi niską temperaturę. Wszystko to przyczynia się do jej długotrwałej ochrony w środowisku zewnętrznym. W temperaturze pokojowej przeżywa kilka tygodni, w temperaturze 60 ° C częściowo traci infekcyjność po 4-12 godzinach, całkowicie - po kilku minutach w temperaturze 85 ° C Bardzo odporny na chlor, dzięki czemu może przenikać do wody wodociągowej przez bariery w zakładach uzdatniania wody.

Podsumowując wszystkie dane, możemy scharakteryzować wirusa zapalenia wątroby typu A w następujący sposób:

• naturalnym mistrzem jest człowiek;
• zwierzęta doświadczalne - marmozet, szympans;
• źródło infekcji - kał;
• choroba - epidemiczna i endemiczna;
• droga transmisji jest fekalno-ustna;
• okres inkubacji - 14-40 dni;
• przejście do przewlekłego zapalenia wątroby - nie zanotowano.

Właściwości immunologiczne NAV są następujące:

• Szczepy prototypowe - Ms-l, CR-326, GVG. Wszystkie są immunologicznie podobne lub identyczne;
• Przeciwciała - IgM i IgG są wytwarzane w odpowiedzi na wprowadzenie białek strukturalnych wirusa i są ochronne;
• I Działanie troficzne ludzkiej y-globuliny surowicy - chroni lub łagodzi chorobę pod warunkiem podania przed infekcją lub podczas okresu inkubacji.

Charakterystyki fizyko-chemiczne NAU są następujące:

• Morfologia jest sferyczną cząstką bez powłoki o symetrii sześciennej, kapsyd składa się z 32 kapsomerów;
• Średnica wynosi 27-30 nm;
• Gęstość w CsCl (g / cm3) wynosi 1,38-1,46 (otwarte cząstki), 1,33-1,34 (dojrzały wirion), 1,29-1,31 (niedojrzałe wiriony, puste cząstki);
• Współczynnik sedymentacji wynosi 156-160 dojrzałych wirionów;
• Kwas nukleinowy - jednoniciowy, liniowy RNA;
• Względna masa cząsteczkowa - 2,25 106-2,8 106KD;
• Liczba nukleotydów wynosi 6500-8 100.

Stabilność NAV w efektach fizykochemicznych przedstawia się następująco:

• Chloroform, eter - jest stabilny;
• Chlor, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - częściowa inaktywacja;
• Chloramina, 1 g / l, 20 ° C, 15 minut - całkowita inaktywacja;
• Formalina, 1: 4000, 35-37 ° С, 72 godziny - całkowita inaktywacja, 1: 350, 20 ° C, 60 minut - częściowa inaktywacja.

Temperatura:

• 20-70 ° C - stabilny;
• 56 ° С, 30 minut - jest stabilny;
• 60 ° С, 12 godzin - częściowa inaktywacja;
• 85 ° С, 1 min - pełna inaktywacja;
• Autoklawowanie, 120 ° C 20 minut - całkowita inaktywacja;
• Suche ciepło, 180 ° C, 1h - całkowita inaktywacja;
• UV, 1,1 W, 1 min - całkowita inaktywacja.

Przedstawione dane wskazują, że właściwości fizykochemiczne wirusa zapalenia wątroby typu A są najbliższe enterowirusom. Podobnie jak inne enterowirusy, HAV jest odporny na wiele roztworów dezynfekujących, całkowicie inaktywowanych przez kilka minut w temperaturze 85 ° C i autoklawowanych.

Udowodniono, że wirus zapalenia wątroby typu A może być reprodukowany w liniach hodowli monowarstwowych komórek pierwotnych i transplantacyjnych komórek ludzkich i małpich. Szczególnie aktywne rozmnażanie wirusa zapalenia wątroby typu A w hodowlach in vitro obserwuje się, gdy jako materiał wyjściowy stosuje się wyciągi z wątroby małpich pacjentów. Jednakże, należy zauważyć, że we wszystkich doświadczeniach według reprodukcji wirus zapalenia wątroby A w hodowlach in vitro zwrócić uwagę długi okres inkubacji w przejściach podstawowych (-10 do 4 tygodni), następnie akumulacji wirusowego genetycznego materiału zwiększa, ale wartości bezwzględne są bardzo nieistotne, co pozwala wielu badaczom mówić o niepełnej replikacji wirusa zapalenia wątroby typu A w kulturach tkankowych.

Podsumowując dane literaturowe dotyczące reprodukcji wirusa zapalenia wątroby typu A z kultur innych niż korzenie, można stwierdzić, że fakt przedłużonego doświadczenia HAV in vitro jest niepodważalny. Optymalne warunki dla stabilnego wysokiego poziomu replikacji wirusa nie zostały ostatecznie zidentyfikowane, co ogranicza badanie jego biologicznych właściwości, wytwarzanie źródła odczynników do produkcji diagnostyki i projektowania szczepionek.

Jednocześnie bardziej optymistyczne sądy na temat tego problemu można znaleźć w literaturze. Rozwiązanie wszystkich problemów związanych z hodowlą wirusa zapalenia wątroby typu A to kwestia najbliższej przyszłości. Badając optymalne warunki HAV propagacji hodowli komórek zarodkowych nerki małpy rezus ujawniła dwa etapy: etap wytwarzania wirusów zakaźnych (aż do 6-8 dni na 5 pasaż) i fazy intensywnego nagromadzenia antygenu wirusowego. Pokazano również, że najbardziej znacząca akumulacja antygenu wirusowego występuje w warunkach tak zwanej hodowli rolkowej (wirujące butelki). W ten sposób otwierają się szerokie możliwości uzyskania antygenu kulturowego w dużych ilościach, w wyniku czego pojawi się materiał wyjściowy do przygotowania systemów diagnostycznych i wytwarzania preparatów szczepionek.

Epidemiologia zapalenia wątroby typu A

Wirus zapalenia wątroby typu A ma wysoką chorobotwórczość u ludzi. Zgodnie z wnioskiem WHO (1987), na początek choroby wystarczy zakażenie tylko jednego wirionu. Jednak praktyczna dawka zakaźna jest prawdopodobnie znacznie wyższa. Źródłem infekcji jest tylko osoba zarażona. Wirus uwalniany jest w dużych ilościach z kałem 12-14 dni przed pojawieniem się żółtaczki iw ciągu 3 tygodni. Okres żółtaczkowy. Nie zidentyfikowano znaczących różnic w izolowaniu patogenu u pacjentów z żółtaczkowymi, żółtaczkowymi i bezobjawowymi postaciami zapalenia wątroby typu A. Metodą infekcji jest droga fekalno-ustna, głównie wodna, a także droga domowa i spożywcza. Metodą zakażenia jest droga fekalno-ustna, głównie wodna, a także droga domowa i spożywcza. Główną (pierwotną) drogą przenoszenia wirusa jest woda. Możliwe jest również zakażenie przenoszone drogą powietrzną. Podatność populacji jest powszechna. Przeważnie są to dzieci w wieku poniżej 14 lat. Choroba ma wyraźną sezonowość jesienno-zimową.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Objawy zapalenia wątroby typu A

Okres inkubacji waha się od 15 do 50 dni, co zależy od ilości infekującej dawki wirusa, ale średnio wynosi 28-30 dni. Gdy w organizmie, wirus zapalenia wątroby typu A replikacji w okolicznych węzłach chłonnych, w krwi i komórek wątroby i ostre zapalenie wątroby powoduje rozproszone, które towarzyszą zmiany w hepatocytach i komórkach siateczkowo-śródbłonkowych wątroby i zmniejszenie ich detoksykacji i barierowych funkcji. Uszkodzenie hepatocytów nie występuje z powodu bezpośredniego działania wirusa, ale w wyniku mechanizmów immunopatologicznych. Najbardziej typowy obraz zapalenia wątroby typu A jest ostry żółtaczkowych tworzą cykliczny: okres inkubacji prodromalny (preicteric) żółtaczki i okres rekonwalescencji. Jednakże w ognisk zakażenia ujawnia dużą liczbę pacjentów bezobjawowych i anicteric formy infekcji, których liczba przeważa nad żółtaczkowe ( „lodowej zjawiska”).

Odporność po infekcji jest silna i długotrwała, spowodowana przez przeciwciała neutralizujące wirusa i komórki pamięci immunologicznej.

Diagnostyka mikrobiologiczna zapalenia wątroby typu A

Rozpoznanie zapalenia wątroby typu A (z wyjątkiem zakażenia zwierząt - szympansów marmozet, pawianów, które nie) w oparciu o różne metody immunologiczne: metodę immunofluorescencji DGC, hemaglutynacji przyczepności odpornościowego (kompleks antygenu wirusowego + przeciwciała w obecności dopełniacza zaadsorbowanego na erytrocytach i powoduje, że ich przyczepność) . Jednakże, zastosowanie tych metod jest ograniczone ze względu na brak specyficznych antygenów wirusowych i reakcji immunofluorescencji wymaga biopsji wątroby, co jest niepożądane. Niezawodna i swoista jest metoda mikroskopii elektronowej odporności, ale jest bardzo pracochłonna. Dlatego, dopóki tylko dopuszczalny sposób w reakcji immunologicznej jest test immunoenzymatyczny fazę stałą w postaci ipm lub obrzeże, w szczególności modyfikacją „capture” immunoglobuliny M. W naszym kraju W tym celu zaproponowano układ testowy - „diag-A-geo”. Zasada działania tego systemu testowego jest następująca. Na ścianach polistyrenu lunochek wchłonięty pierwsze przeciwciała przeciwko immunoglobulinom klasy M (antiimmunoglobuliny M), a następnie dodaje się do badanej surowicy pacjenta. Jeżeli istnieje klasa IgM, będą wiązać się z przeciwciałem-Ti-M, a następnie dodaje się do danego antygenu wirusowego zapalenia wątroby typu A (wirus), który uzyskuje się poprzez wzrost w hodowli komórkowej. System przepłukuje się, i do tego dodaje się przeciwwirusowe przeciwciała znakowane peroksydazą chrzanu. Jeśli wszystkie cztery elementy systemu oddziałują, powstaje czterowarstwowa "kanapka":

• antyimmunoglobuliny M,
• immunoglobuliny M (przeciwko wirusowi zapalenia wątroby typu A - w surowicy testowej pacjenta),
• antygen wirusowy,
• przeciwciała przeciwwirusowe znakowane enzymem.

Aby wykryć ten kompleks, do lunet dodaje się substrat dla enzymu. Pod wpływem enzymu zostaje zniszczony i powstaje kolorowy produkt. Intensywność koloru można zmierzyć ilościowo za pomocą spektrofotometru lub fotokolorymetru.

Zaletą metody "wychwytywania" IgM jest to, że przeciwciała tej klasy immunoglobulin pojawiają się przy pierwotnej odpowiedzi immunologicznej i wskazują na aktywny etap infekcji, znikają po przeniesionej chorobie. Przeciwwirusowe przeciwciała należące do klasy IgG, przeciwnie, utrzymują się przez długi czas po chorobie, zapewniając nabytą odporność. W celu wykrycia wirusa zapalenia wątroby typu A zaproponowano metodę sondy DNA: sondę vRNA komplementarną stosuje się jako sondę.

Leczenie zapalenia wątroby typu A

Ze względu na to, że produkcja interferonu jest zakłócona w wirusowym zapaleniu wątroby, leczenie wirusowego zapalenia wątroby typu A opiera się na zastosowaniu interferonu i induktora jego endogennej syntezy amixiny.

Szczególne zapobieganie wirusowemu zapaleniu wątroby typu A

Dotychczas powszechnie stosowane seroprevention zapalenia wątroby typu A, stosując gammaglobulina nie uzasadnia jednak, nacisk został położony na immunizacji, przeprowadzanych szczepionki przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu A. W tym celu opracowywane są różne warianty szczepionek, które są już wykorzystywane. W Rosji skuteczna szczepionka przeciw wirusowemu zapaleniu wątroby typu A została uzyskana w 1995 r., A teraz została z powodzeniem zastosowana.