Konfokalna mikroskopia wewnątrznaczyniowa rogówki

Konfokalna mikroskopia rogówki jest jedną z nowoczesnych metod badania; pozwala na śródsenne monitorowanie stanu rogówki z wizualizacją tkanek na poziomie komórkowym i mikrostrukturalnym.

Metoda ta, dzięki oryginalnemu projektowi mikroskopu i jego wysokiej rozdzielczości, umożliwia wizualizację żywych rogówkowych tkanek , pomiar grubości każdej z warstw oraz ocenę stopnia zaburzeń morfologicznych.

Cel konfokalnej mikroskopii rogówki

Scharakteryzuj zmiany morfologiczne rogówki, wynikające z różnych chorób zapalnych i dystroficznych, a także z interwencji chirurgicznych i efektów CR.

Dane morfologiczne są potrzebne do oceny ciężkości procesu patologicznego, skuteczności leczenia i określenia taktyki postępowania z pacjentem.

Wskazania do zabiegu

• Choroby zapalne rogówki ( zapalenie rogówki ).
• Choroby dystroficzne rogówki ( keratoconus, dystrofia Fuchsa itp.).
• Syndrom "suchego oka".
• Stany po zabiegach chirurgicznych na rogówce (poprzez przeszczep rogówki, operacje rogowacenia).
• Warunki związane z noszeniem soczewek kontaktowych.

[1], [2], [3], [4]

Przygotowanie

Badanie to jest możliwe bez użycia środków znieczulających. Kroplę cieczy zanurzeniowej umieszcza się na soczewce soczewki mikroskopu konfokalnego. Eliminuje to bezpośredni kontakt soczewki z rogówką i minimalizuje ryzyko uszkodzenia nabłonka.

[5], [6], [7], [8], [9],

Technika konfokalna mikroskopia rogówki

Badanie przeprowadzono na konfokalnym mikroskopie ConfoScan 4 (Nider) ze wzrostem 500 razy. Urządzenie pozwala badać rogówkę na całej jej grubości.

Rozmiar badanej strefy wynosi 440 × 330 μm, grubość warstwy skanującej wynosi 5 μm. Soczewkę z kroplą żelu doprowadza się do rogówki w celu dotyku i ustawienia tak, aby grubość zanurzonej warstwy cieczy wynosiła 2 mm. Konstrukcja urządzenia pozwala zbadać rogówkę w strefie centralnej i jej okolicach śródokresowych.

Przeciwwskazania do zabiegu

Względne przeciwwskazanie oznacza podrażnienie oka na tle ostrego procesu zapalnego.

[10], [11]

Normalna wydajność

Normalny obraz morfologiczny rogówki

Przedni nabłonek składa się z 5-6 warstw komórek. Średnia grubość całego nabłonka wynosi około 50 μm. Zgodnie ze strukturą morfologiczną wyróżniamy następujące warstwy (od wewnątrz na zewnątrz): podstawowe, szydłowate i powierzchowne.

• Najgłębsza (podstawowa) warstwa jest reprezentowana przez małe, gęste cylindryczne komórki bez widocznego jądra. Granice podstawowych komórek są wyraźne, jasne.
• Warstwa środkowa składa się z 2-3 warstw kręgosłupowych (skrzydlate) komórek z głębokimi inwokacjami, w których powstają wyrostki sąsiednich komórek. Mikroskopowo granice komórek są dość dobrze rozróżnialne, a jądra mogą nie być zdefiniowane lub mogą być niewyraźne.
• Warstwa powierzchniowa nabłonka jest reprezentowana przez jedną lub dwie warstwy wielokątnych komórek z jasnymi granicami i jednorodną gęstością. Jądra są zwykle jaśniejsze niż cytoplazma, w której można również odróżnić ciemny pierścień w pobliżu jądra.

Wśród komórek warstwy powierzchniowej rozróżnia się ciemność i światło. Zwiększona odblaskowość komórek nabłonkowych wskazuje na obniżenie poziomu metabolizmu w nich oraz na początek ich złuszczania.

Membrana Bowmana jest przezroczystą strukturą, która nie odbija światła, więc nie można jej wizualizować, gdy wykonywana jest mikroskopia konfokalna.

Podzięgna splotu nerwowego znajduje się pod membraną Bowmana. Zwykle włókna nerwowe wyglądają jak jasne paski biegnące równolegle na ciemnym tle, stykające się ze sobą. Odbicie (odbicie) może być nierównomierne w długości włókien.

Zręby rogówki zajmują 80-90% grubości rogówki i składają się z komponentu komórkowego i zewnątrzkomórkowego. Podstawowymi komórkowymi elementami zrębu są keratocyty; stanowią około 5% objętości.

Typowy mikroskopowy wzór zrębu zawiera kilka jasnych nieregularnych owalnych korpusów (jądra rogówkowego) leżących na grubości przezroczystej ciemnoszarej lub czarnej matrycy. Zwykle wizualizacja struktur pozakomórkowych jest niemożliwa ze względu na ich przezroczystość. Zręby można warunkowo podzielić na podwarstwy: przednie (zlokalizowane bezpośrednio pod membraną Bowmana i stanowiące 10% grubości podścieliska), przednie, środkowe i tylne.

Średnia gęstość keratocytów jest większa w zrębie przednim, stopniowo ich liczba zmniejsza się w kierunku warstw tylnych. Gęstość komórek zrębu przedniej prawie dwa razy większa niż tylne komórki zrębu (jeśli gęstość komórek przedniego zrębu przyjęto jako 100%, gęstości tyłu około 53,7% komórek). W zrębie przednim jądra rogowacie mają kształt o kształcie okrągłej fasoli, a w tylnym owalu i bardziej wydłużone.

Jądra keratocytów mogą różnić się jasnością. Różna zdolność odbijania światła zależy od ich stanu metabolicznego. Jaśniejsze komórki są uważane za aktywowane keratocyty ("komórki stresowe"), których aktywność ma na celu utrzymanie wewnętrznej homeostazy rogówki. W normie i polu widzenia istnieją pojedyncze aktywowane komórki.

Włókna nerwowe w przednim zrębie rogówki są wizualizowane jako jasne jednorodne pasma, często tworząc bifurkacje.

Membrana descemet jest zwykle przezroczysta i nie jest wizualizowana przez mikroskopię konfokalną.

Tylny nabłonek jest pojedynczą warstwą sześciokątnych lub wielokątnych płaskich komórek o jednolitej powierzchni na tle wyraźnych ciemnych granic międzykomórkowych.

Urządzenie zapewnia możliwość ręcznego lub automatycznego obliczania gęstości komórek, ich powierzchni i współczynnika zmienności.

Patologiczne zmiany w strukturze rogówki

Keratoconus charakteryzuje się znaczącymi zmianami w nabłonku przednim i zrębie rogówki.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20]