Konfokalna dożywotnia mikroskopia rogówki

Mikroskopia konfokalna rogówki jest jedną z nowoczesnych metod badawczych. Pozwala na przyżyciowy monitoring rogówki i uwidocznienie tkanki na poziomie komórkowym i mikrostrukturalnym.

Metoda ta, dzięki oryginalnej konstrukcji mikroskopu i jego dużej zdolności rozdzielczej, pozwala na obrazowanie żywej tkanki rogówki, pomiar grubości każdej jej warstwy i ocenę stopnia zaburzeń morfologicznych.

Cel konfokalnej mikroskopii rogówki

Charakterystyka zmian morfologicznych rogówki zachodzących w przebiegu różnych chorób zapalnych i dystroficznych, a także na skutek interwencji chirurgicznych i narażenia na CL.

Dane z badania morfologicznego są niezbędne do oceny stopnia zaawansowania procesu patologicznego, skuteczności leczenia i ustalenia taktyki postępowania z pacjentem.

Wskazania do zabiegu

• Choroby zapalne rogówki ( zapalenie rogówki ).
• Choroby dystroficzne rogówki ( stożek rogówki, dystrofia Fuchsa itp.).
• Zespół suchego oka.
• Stany po zabiegach chirurgicznych na rogówce (penetrujący przeszczep rogówki, zabiegi refrakcyjne rogówki).
• Stany związane z noszeniem soczewek kontaktowych.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Przygotowanie

Badanie to można wykonać bez użycia środków znieczulających. Kropla płynu immersyjnego jest umieszczana na soczewce obiektywu mikroskopu konfokalnego. Eliminuje to bezpośredni kontakt soczewki z rogówką i minimalizuje ryzyko uszkodzenia nabłonka.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Technika mikroskopia konfokalna rogówki

Badanie wykonuje się przy użyciu mikroskopu konfokalnego ConfoScan 4 (Nider) o powiększeniu 500 razy. Urządzenie pozwala na zbadanie rogówki na całej jej grubości.

Rozmiar badanego obszaru wynosi 440×330 μm, grubość warstwy skanującej wynosi 5 μm. Soczewkę z kroplą żelu doprowadza się do rogówki aż do jej zetknięcia i instaluje się tak, aby grubość warstwy cieczy immersyjnej wynosiła 2 mm. Konstrukcja urządzenia umożliwia badanie rogówki w strefie centralnej i jej obszarach paracentralnych.

Przeciwwskazania do zabiegu

Przeciwwskazaniem względnym jest silne podrażnienie oczu spowodowane ostrym procesem zapalnym.

[ 10 ], [ 11 ]

Normalna wydajność

Normalny obraz morfologiczny rogówki

Nabłonek przedni składa się z 5-6 warstw komórek. Średnia grubość całego nabłonka wynosi około 50 µm. Zgodnie ze strukturą morfologiczną wyróżnia się następujące warstwy (patrząc od wewnątrz): komórki podstawne, szydłokształtne i powierzchowne.

• Najbardziej wewnętrzna (podstawowa) warstwa jest reprezentowana przez małe, gęste, cylindryczne komórki bez widocznego jądra. Granice komórek podstawnych są wyraźne i jasne.
• Warstwa środkowa składa się z 2-3 warstw kolczastych (skrzydlatych) komórek z głębokimi wgłębieniami, w które są wtopione wyrostki sąsiednich komórek. Mikroskopowo granice komórek są dość wyraźnie rozróżnialne, a jądra mogą być niejasne lub niejasne.
• Powierzchniowa warstwa nabłonka jest reprezentowana przez jedną lub dwie warstwy wielokątnych komórek o wyraźnych granicach i jednorodnej gęstości. Jądra są zwykle jaśniejsze od cytoplazmy, w której można również wyróżnić okołojądrowy ciemny pierścień.

Wśród komórek warstwy powierzchniowej wyróżnia się komórki ciemne i jasne. Zwiększona refleksyjność komórek nabłonkowych wskazuje na spadek ich tempa metabolizmu i rozpoczynające się złuszczanie.

Błona Bowmana jest przezroczystą strukturą, która nie odbija światła, dlatego zazwyczaj nie da się jej uwidocznić za pomocą mikroskopii konfokalnej.

Splot nerwu podpodstawnego znajduje się pod błoną Bowmana. Zazwyczaj włókna nerwowe wyglądają jak jasne paski biegnące równolegle na ciemnym tle, stykające się ze sobą. Odblaskowość (reflectivity) może być nierówna wzdłuż włókna.

Stroma rogówki zajmuje 80-90% grubości rogówki i składa się ze składników komórkowych i pozakomórkowych. Głównymi elementami komórkowymi stroma są keratocyty; stanowią one około 5% objętości.

Typowy obraz mikroskopowy stroma obejmuje kilka jasnych, nieregularnych, owalnych ciał (jąder keratocytów), które leżą w grubości przezroczystej, ciemnoszarej lub czarnej macierzy. Zwykle wizualizacja struktur pozakomórkowych jest niemożliwa ze względu na ich przezroczystość. Stromę można warunkowo podzielić na podwarstwy: przednią (znajdującą się bezpośrednio pod błoną Bowmana i stanowiącą 10% grubości stroma), przednio-środkową, środkową i tylną.

Średnia gęstość keratocytów jest wyższa w przedniej części podścieliska, stopniowo zmniejszając się w kierunku warstw tylnych. Gęstość komórek podścieliska przedniego jest prawie dwukrotnie wyższa niż gęstość komórek podścieliska tylnego (jeśli gęstość komórek podścieliska przedniego przyjmiemy jako 100%, wówczas gęstość komórek podścieliska tylnego wyniesie około 53,7%). W przedniej części podścieliska jądra keratocytów mają zaokrąglony kształt fasoli, podczas gdy w tylnej części podścieliska są owalne i bardziej wydłużone.

Jądra keratocytów mogą różnić się jasnością. Różna zdolność odbijania światła zależy od ich stanu metabolicznego. Jaśniejsze komórki są uważane za aktywowane keratocyty (komórki „stresowe”), których aktywność ma na celu utrzymanie wewnętrznej homeostazy rogówki. W polu widzenia i normie znajdują się pojedyncze aktywowane komórki.

Włókna nerwowe w przedniej części podścieliska rogówki widoczne są jako jasne, jednorodne pasma, często tworzące rozwidlenia.

Błona Descemeta jest zazwyczaj przezroczysta i nie można jej zobaczyć za pomocą mikroskopii konfokalnej.

Nabłonek tylny jest pojedynczą warstwą sześciokątnych lub wielokątnych płaskich komórek o równomiernie jasnej powierzchni na tle wyraźnych, ciemnych granic międzykomórkowych.

Urządzenie pozwala na ręczne lub automatyczne obliczanie gęstości komórek, ich powierzchni oraz współczynnika zmienności.

Zmiany patologiczne w strukturze rogówki

Stożek rogówki charakteryzuje się znacznymi zmianami w nabłonku przednim i zrębie rogówki.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]