Badania immunologiczne w urologii

Przypisanie immunogramu pacjentowi urologicznemu oznacza, że lekarz prowadzący przyjmuje obecność zaburzeń w układzie odpornościowym. Duplikat bakteryjne, zakażenia wirusowe, zakażenia grzybicze, reakcje alergiczne, choroby układowe może objawów tych zaburzeń, które cechują się wieloma zespołami (zakażenie, alergicznych, autoimmunologicznych, limfoproliferacyjne). Jeden pacjent może mieć kilka zespołów. Na przykład przewlekłe choroby zakaźne (zespół zakaźny) mogą powodować niedobór odporności, a niedobór odporności może objawiać się predyspozycją do chorób zakaźnych i onkologicznych (zespół onkologiczny). Predyspozycje do infekcji mogą wystąpić na tle wtórnego niedoboru odporności, który rozwinął się w wyniku choroby limfoproliferacyjnej, na przykład białaczki. Istnieją trzy główne grupy patologicznych zmian w układzie odpornościowym:

• niewydolność ilościowa lub czynnościowa jednego lub drugiego ogniwa odporności, która prowadzi do rozwoju stanu niedoboru odporności;
• naruszenie w rozpoznawaniu antygenu przez układ odpornościowy, prowadzące do rozwoju procesów autoimmunologicznych;
• hiperreaktywna lub "zdemoralizowana" odpowiedź immunologiczna przejawiająca się rozwojem chorób alergicznych.

Przeprowadzono badania przesiewowe (testy poziomu 1) i kwalifikacje (testy 2-poziomowe) metod immunodiagnostyki. Te pierwsze istnieją, aby naprawić naruszenia w systemie immunologicznym, te ostatnie - w celu ustalenia mechanizmów zaangażowanych w ich realizację w celu dalszej immunokorekcji.

B-Komórkowe ogniwo odporności

Metody przesiewowe

• Oznaczanie względnej i absolutnej liczby limfocytów B za pomocą immunofluorescencji i cytometrii przepływowej przy użyciu przeciwciał monoklonalnych przeciwko antygenom komórek B (CD19, CD20, przy czym CD - klastrów różnicowania). Zawartość limfocytów B jest normalna u dorosłych: 8-19% całkowitej liczby leukocytów lub 190-380 komórek / μl. Zwiększenie stężenia limfocytów B występuje w ostrych i przewlekłych zakażeniach bakteryjnych i grzybiczych, przewlekłych chorobach wątroby, ogólnoustrojowych chorobach tkanki łącznej, przewlekłej białaczce limfatycznej, szpiczaku.
• Oznaczanie stężenia immunoglobuliny nespespetsificheskih (F, M, G, E) o pojedynczej immunodyfuzji radialnej lub turbometrii nefelometrii, test radioimmunologiczny lub test immunologiczny (EIA). Normy dla dorosłych: immunoglobuliny (Ig) A 0,9-4,5 g / l. IgM 03-3,7 g / l. IgG 8,0-17 g / l. Zwiększenie stężenia immunoglobulin zachodzi w tych samych warunkach patologicznych, w których występuje zwiększenie zawartości limfocytów B. Zmniejszenie stężenia immunoglobuliny jest wrodzoną hipogammaglobulinemia nowotwory układu odpornościowego, usunięcie śledziony, utrata białka w chorobach nerek i jelit, leczenia i immunodepreesantami cytostatycznych.

Określanie metod

• Oznaczanie krążących kompleksów immunologicznych we krwi przez selektywne strącanie w glikolu polisilenowym, a następnie spektrofotometryczne badanie gęstości (normalne 80-20 UE). Wzrost krążących kompleksów immunologicznych jest charakterystyczny dla ostrych infekcji bakteryjnych, grzybiczych, wirusowych, autoimmunologicznych, immunoskładowych, choroby posurowiczej, reakcji alergicznych typu 3;
• Określenie specyficznych immunoglobulin w surowicy krwi w stosunku do antygenów bakteryjnych i wirusowych, kwasu dezoksyrybonukleinowego (DNA), w chorobach autoimmunologicznych, identyfikacji plemników (niepłodność autoimmunologiczna) i protivopochechnyh przeciwciał (odmiedniczkowe zapalenie nerek i kłębuszkowe zapalenie nerek), przez immunodyfuzję promienistą lub ELISA.
• Oznaczenie przeciwciał antyspermowych w spermie [test MAR (mieszana reakcja antyglobulinowa)], jest normą negatywną.
• Oznaczanie stężenia immunoglobulin w moczu dla celów diagnostyki różnicowej między odmiedniczkowym zapaleniem nerek a zapaleniem kłębuszków nerkowych (selektywność białkomoczu).
• Oznaczanie zawartości IgE w soku gruczołu krokowego w diagnostyce alergicznego zapalenia stercza za pomocą radialnej immunodyfuzji lub ELISA. 
• Badania w reakcji blasttransformation reakcji limfocytów B na mitogeny komórek B (mitogen szkarłatki stymulacji reakcji blasttransformation z limfocytów B, w obecności limfocytów T), w którym średnia wartość 95-100%.

Linke odporności komórkowej T

Metody przesiewowe

• Oznaczanie względnej i absolutnej liczby reakcji limfocytów T CD3 dojrzały immunofluorescencyjnej lub przepływu cytofluorymetrii SDZ zastosowaniem przeciwciał monoklonalnych. Norma dla dorosłych wynosi 58-76% lub 1100-1700 komórek / μl. Zmniejszenie liczby komórek wskaźnik odporności brak limfocytów T. Jest to charakterystyczne dla wielu drugorzędowych i pierwszorzędowych Odporności (przewlekłych infekcji bakteryjnych i wirusowych: gruźlicy, zespół nabytego upośledzenia odporności, raka, przewlekłą niewydolność nerek, uraz, starzenie się, stres, niedożywienie, leczenie lekami cytotoksycznymi, promieniowanie jonizujące). Zwiększenie liczby limfocytów T jest na tle immunologicznym lub nadpobudliwość chorób limfoproliferacyjnych. Gdy zapalenie liczba limfocytów T jest najpierw podnoszona i obniżana. Nie zmniejszenie limfocytów T sugeruje, przewlekły stan zapalny.
• Ocena subpopulacji limfocytów.
  • Określanie liczby pomocników T (przeciwciała anty-CD4). Zwykle 36-55% lub 400-1100 komórek / μl. Wzrost liczby tych komórek występuje w chorobach autoimmunologicznych, chorobie Waldenstroma, aktywacji wszczepienia antygraftów; Zmniejszenie liczby komórek T pomocniczych pojawia się przewlekłe zakażenia bakteryjne, wirusowe, zakażenia pierwotniakami, gruźlica, zespół nabytego niedoboru odpornościowego, nowotworów, oparzenia, traumy, niedożywienie, starzenie, leczenie cytostatykami, promieniowania jonizującego.
  • Wyznaczanie liczby supresorów T (przeciwciało anty-CD4). Zwykle 17-37% lub 300-700 komórek / μl. Wzrost liczby T-supresorów występuje w tych samych warunkach, w których zmniejsza się liczba pomocników T, oraz ich spadku w tych samych warunkach, kiedy wzrasta zawartość T-pomocników.
  • Wskaźnik immunoregulacyjny CD4 / CD8, w normie 1,5-2,5. Nadpobudliwość z częstością większą niż 2,5 (choroby alergiczne i autoimmunologiczne); niedoczynność - mniej niż 1,0 (predyspozycje do przewlekłych zakażeń). Na początku procesu zapalnego indeks immunoregulacyjny wzrasta, a gdy ustąpi, normalizuje się.

Określanie metod

• Oznaczanie liczby naturalnych zabójców (komórek NK) - przeciwciała anty-CD16 i anty-CD56. Norma dla limfocytów CD 16 wynosi 6-26%, CD56 - 9-19%. Zwiększenie liczby komórek NK występuje odrzucenie przeszczepu zmniejszenia - w infekcjach wirusowych, nowotworów, niedobory odporności pierwotnych i wtórnych, oparzenia, traumy, stres, leczenie cytostatykami i promieniowania jonizującego. 
• Oznaczanie liczby limfocytów T receptorem dla interleukiny-2 (marker aktywacyjny) - przeciwciała anty-CD25. Norma to 10-15%. W tych samych chorób, obejmujących zmniejszenie liczby komórek NK - wzrost ich ilości w przypadku chorób alergicznych, odrzucania przeszczepu, odpowiedzi na antygeny zależne od grasicy w ostrej infekcji pierwotnej, zmniejszenie obserwowano.
• Badanie ekspresji markera aktywacyjnego - cząsteczki zgodności tkankowej HLA-DR klasy II. Zwiększona ekspresja występuje w procesach zapalnych, u pacjentów z WZW typu C, celiakią, kiłą, ostrymi infekcjami dróg oddechowych.
• Ocena apoptozy limfocytów. Wskazanie gotowości limfocytów apoptozy można określić przez ich ekspresji powierzchniowego receptora Fas (CD95) w mitochondriach i BD-2 protoonkogenu. Apoptozę oceniano przez obróbkę limfocytów dwa barwniki fluorescencyjne: jodkiem propidium, co wiąże się z fragmentami DNA, a aneksyna Y wiązania się fosfatydyloseryny na błonie komórek znajdującego się w początku apoptozy. Ocenę wyników przeprowadzono na cytofluorymecie przepływowym. Obliczenie wyników opiera się na stosunku komórek barwionych różnymi barwnikami. Niezabarwionych komórek są żywe komórki, związane tylko z aneksyną Y, - pierwsze oznaki apoptozy, z jodkiem propidyny i aneksyny I - późne objawy apoptozy, barwienie tylko jodek propidyny oznacza martwicy.
• Ocena proliferacji limfocytów T in vitro.
  • Zmiana w blastogenezie komórkowej jest reakcją transformacji blastycznej limfocytów. Leukocyty inkubuje się z dowolnym mitogenem pochodzenia roślinnego (lektynami). Częściej stosowana fitohemaglutynina przez 72 godziny, a następnie zrobić rozmaz, plam ją i policz ilość wybuchów! Wskaźnik stymulacji jest stosunkiem procentowym transformowanych komórek w eksperymencie (hodowla z fitohemaglutyniną) do procentu transformowanych komórek w kontroli (hodowla bez fitohemaglutyniny). Reakcję transformacji blastycznej limfocytów można ocenić przez włączenie znacznika radioaktywnego (ZN-tyminina) w hodowanych komórkach, ponieważ synteza DNA wzrasta podczas dzielenia komórek. Zaburzenia odpowiedzi proliferacyjnej występują zarówno w pierwotnym, jak i wtórnym niedoborze odporności związanym z infekcjami, chorobami nowotworowymi, niewydolnością nerek i interwencjami chirurgicznymi.
  • Ocena tych badaniach ekspresji markerów aktywacji CD25 (receptor transferyny - CD71) i cząsteczek MHC klasy II HLA-DR, które są zasadniczo nieobecne w spoczynku limfocyty T. Limfocyty T stymulowano fitohemaglutyniną po 3 dniach ekspresji markerów aktywacji analizowano przez bezpośrednią lub pośrednią immunofluorescencję cytometrii przepływowej przy użyciu monoklonalnych przeciwciał wydzielanych receptorów.
  • Pomiar ilości mediatorów syntetyzowany przez aktywowane limfocyty T [interleukiny (IL), 2, IL-4, IL-5, IL-6, interferon gamma, itd.], Za pomocą testu radioimmunologicznego lub testu ELISA. Szczególnie ważna jest ocena stężenia y-interferonu i IL-4 jako markerów TH i Th2 w supernatancie aktywowanych kultur iw komórce. Jeśli to możliwe, przydatne jest określenie ekspresji genu dla odpowiedniej cytokiny na podstawie poziomu matrycowego kwasu rybonukleinowego w komórce produkującej i intensywności ekspresji receptorów dla odpowiednich cytokin.
    
• Reakcja hamowania migracji limfocytów. Uczulone limfocyty T w reakcji z limfokinami uwalniającymi antygen, w tym czynnikami. Hamowanie migracji limfocytów. Zjawisko zahamowania obserwuje się, gdy mitogeny są wprowadzane do hodowli komórek. Ocena stopnia hamowania pozwala ocenić zdolność limfocytów do uwalniania cytokin. Zwykle częstotliwość migracji, w zależności od konkretnego mitogenu, wynosi 20-80%.
• Ocena cytotoksyczności komórek NK. Określić zdolność naturalnych komórek zabójczych do zabijania komórek docelowych linii erytromielinowej K-562. Jeśli ocenia się cytotoksyczność zależną od przeciwciał, stosuje się komórki docelowe opłaszczone przeciwciałami IgG. Komórki docelowe są znakowane 3H-urydyny i inkubowane z komórkami efektorowymi. Śmierć komórek docelowych jest szacowana na podstawie uwalniania radioaktywnej etykiety do roztworu. Zmniejszenie cytotoksyczności występuje w przypadku nowotworów złośliwych. W niektórych przypadkach, gdy wymagane jest prognozowanie skuteczności leczenia interleukinami, cytotoksyczność komórek NK ocenia się po inkubacji z pewnymi cytokinami.

Badanie funkcji fagocytów

Metody przesiewowe

Badanie absorpcji komórek drobnoustrojów przez fagocyty (fagocytoza cząstek lateksu, hodowla testowa gronkowców, Escherichia coli lub drobnoustrojów wyizolowanych od pacjenta). Przez odwirowanie heparynizowanej krwi izoluje się zawiesinę leukocytów, dodaje się surowicę grupy krwi IV w celu opsonizacji (opsoniny są białkami, które wzmacniają fagocytozę). Zawiesinę drobnoustrojów rozcieńcza się, miesza z leukocytami i inkubuje przez 120 minut, pobieranie próbek do analizy po 30.90.120 minutach od rozpoczęcia inkubacji. Z wybranych zawiesin leukocytów tworzy się rozmazy. Określ następujące wskaźniki fagocytozy:

• wskaźnik fagocytarny - procent komórek, które weszły w fazę fagocytozy w czasie 30 minut i 120 minut inkubacji; wartość normatywna wskaźnika fagocytarnego (30) 94% wskaźnika fagocytarnego (120) - 92%;
• liczba fagocytarna - średnia liczba bakterii wewnątrzkomórkowych; wartość normatywna liczby fagocytów (30) 11%, liczba fagocytów (120) - 9,8%;  
• współczynnik liczby fagocytarnej - stosunek liczby fagocytów (30) do liczby fagocytarnej (120); normalny 1,16;
• wskaźnik bakteriobójczy neutrofilów to stosunek liczby bakterii zabitych wewnątrz fagocytów do całkowitej liczby pobranych mikrobów; w normie 66%.

Określanie metod

• Badanie aktywności bakteriobójczej fagocytów w teście z nitrozyną tetrazoliową (NST) to test NST. Do leukocytów dodaje się barwnik żółtego tetrazoliowego kwasu azotowego. Gdy barwnik jest absorbowany przez neutrofil, proces redukcji odbywa się pod działaniem wolnych rodników tlenu, co powoduje niebieskie zabarwienie. Reakcję prowadzi się na 96-studzienkowej płaskodennej płycie. W pierwszych trzech dołkach z mieszaniną HCT i leukocytów dodaje się roztwór Hanksa (spontaniczny HCT), w drugim - cząstki lateksu; inkubować w 37 ° C przez 25 minut. Wyniki odczytuje się przy 540 nm na czytniku i wyraża się w konwencjonalnych jednostkach. Obliczyć współczynnik stymulacji ( _Kst ), równy stosunkowi gęstości optycznej w studzienkach stymulowanych do średniej gęstości optycznej w studzienkach bez stymulacji. U osób zdrowych _{HCT spont} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _V = 1,78 ± 0,36.
• Badanie cząsteczek adhezyjnych. Za pomocą cytofluorymetrii przepływowej określa się ekspresję antygenów powierzchniowych CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18. Niedobory odporności z naruszeniem adhezji objawiają się nawracającymi infekcjami, powolnym gojeniem się ran i brakiem ropy w ogniskach infekcji.

Badanie systemu dopełniacza

Metody przesiewowe

Oznaczanie aktywności hemolitycznej dopełniacza - badanie klasycznej ścieżki aktywacji dopełniacza. Różne rozcieńczenia surowicy pacjenta i zdrowej osoby dodaje się do erytrocytów owcy opłaszczonej przeciwciałami. Jednostkę aktywności hemolitycznej przyjmuje się jako odwrotność rozcieńczenia surowicy, w której 50% erytrocytów ulega zniszczeniu. Stopień hemolizy ocenia się fotometrycznie na podstawie wydajności hemoglobiny w roztworze. Zmniejszenie aktywności hemolitycznej dopełniacza obserwuje się w układowym toczniu rumieniowatym z zajęciem nerki, ostrym kłębuszkowym zapaleniem nerek. Połączone niedobory odporności, myasthenia gravis, wirusowe zapalenie wątroby, chłoniaki, wzrost - z żółtaczką obturacyjną, Hashimoto tarczycy. Reumatyzm, reumatoidalne zapalenie stawów, guzkowe zapalenie tętnicy. Zapalenie skórno-mięśniowe, zawał mięśnia sercowego, wrzodziejące zapalenie okrężnicy, zespół Reitera, dna moczanowa.

Określanie metod

• Oznaczanie składników dopełniacza. Oznaczenie ilościowe przeprowadza się metodą radialnej immunodyfuzji i nefelometrii.
  Badanie nie ma charakteru informacyjnego, chyba że zmienione zostaną właściwości antygenowe składników dopełniacza.
• Stwierdzono, że składnik Clq dopełniacza zwiększa fagocytozę i pośredniczy w cytotoksyczności komórkowej. Jego zmniejszenie występuje w chorobach kompleksów immunologicznych, układowym toczniu rumieniowatym, ropnych infekcjach i nowotworach.
• Składnik C3 bierze udział w aktywacji klasycznego i alternatywnego szlaku dopełniacza. Zmniejszenie jego stężenia wiąże się z przewlekłymi infekcjami bakteryjnymi i grzybiczymi, obecnością krążących lub tkankowych kompleksów immunologicznych.
• Składnik C4 uczestniczy w aktywacji klasycznego szlaku. Zmniejszenie jego stężenia wiąże się z przedłużoną aktywacją dopełniacza z kompleksami immunologicznymi i zmniejszeniem stężenia inhibitora C1, który kontroluje aktywację klasycznego szlaku dopełniacza. Niedobór C4 występuje z toczniem rumieniowatym układowym, wzrost C4 występuje z chorobą nerek, odrzuceniem przeszczepu, ostrym stanem zapalnym i chorobami przewodu żołądkowo-jelitowego.
• C5a to mały fragment cząsteczki C5, oderwany od niej w wyniku aktywacji układu dopełniacza. Zwiększenie jego stężenia występuje w stanach zapalnych, posocznicy, atopii i chorób alergicznych.
• Inhibitor Cl jest czynnikiem wielofunkcyjnym. Kontroluje aktywację składnika C1 dopełniacza, hamuje aktywność kalikreiny, plazmin i aktywowanego czynnika Hagemana, proteazy Cls i Or. Niedobór inhibitora C1 prowadzi do obrzęku naczynioruchowego.
• uzupełniające badania. Do standardowej surowicy pozbawionej jakiegokolwiek składnika dopełniacza dodawana jest surowica testowa i określana jest aktywność hemolityczna dopełniacza. Jeśli aktywność hemolityczna nie zostanie przywrócona do normy, uważa się, że aktywność tego składnika układu dopełniacza w badanej surowicy jest zmniejszona.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]